Bases estructurales de una interacción esencial entre la polimerasa de la influenza y el CTD Pol II

Área de la Ciencia:

• Virología
• Biología estructural
• Biología molecular

Sus antecedentes:

• La polimerasa de la influenza (FluPol) es esencial para la transcripción y la replicación del ARN viral.
• FluPol interactúa con la ARN polimerasa II celular (Pol II) para adquirir primers con capa 5′ para la transcripción del ARNm.

Objetivo del estudio:

• Para aclarar la base estructural de la interacción entre la polimerasa de la influenza y el dominio C-terminal Pol II (CTD).
• Investigar el significado funcional de esta interacción para la transcripción y replicación viral.

Principales métodos:

• Co-cristalografía de la polimerasa de la gripe A del murciélago con un péptido imitador de Pol II CTD.
• Mutagénesis dirigida al sitio de los residuos identificados de unión a CTD en la subunidad PA.
• Ensayos de síntesis de ARN in vitro y ensayos de minigenoma basados en células.
• Rescate y caracterización de los virus de la gripe recombinantes.

Principales resultados:

• La estructura cristalina reveló dos sitios distintos de unión a la fosfoserina-5 (SeP5) en la subunidad PA que acomodan múltiples repeticiones de CTD.
• La mutagenesis de los residuos de unión a SeP5 debilitó la unión a CTD in vitro, pero redujo significativamente la actividad de la polimerasa en ensayos basados en células.
• Los virus recombinantes con mutaciones en estos sitios fueron atenuados y genéticamente inestables, con algunas mutaciones correlacionadas con factores de virulencia conocidos.

Conclusiones:

• La unión directa de la polimerasa de la influenza con el CTD Pol II, específicamente en los sitios SeP5, es crítica para una transcripción viral eficiente.
• El sitio identificado de unión de CTD en la polimerasa influenza representa un objetivo potencial para el desarrollo de nuevas terapias antivirales.