Perfilamiento de la quinasa de amplio espectro en células vivas con sondas de fluoruro de sulfonilo dirigidas a la...

Área de la Ciencia:

• La bioquímica
• Biología Química
• Farmacología

Sus antecedentes:

• Las proteínas quinasas son objetivos farmacológicos cruciales, pero la inhibición selectiva es un desafío.
• Es difícil cuantificar las interacciones farmacológicas con múltiples quinasas en células vivas.

Objetivo del estudio:

• Diseñar y validar las sondas de fluoruro de sulfonilo para el etiquetado de quinomas amplios.
• Para cuantificar el compromiso de la quinasa intracelular por los fármacos utilizando estas sondas.

Principales métodos:

• Diseño de sondas de fluoruro de sulfonilo dirigidas a los residuos de lisina conservados en los sitios de unión de la ATP quinasa.
• Cristalografía de proteínas y espectrometría de masas para confirmar la reactividad de la sonda.
• Aplicación de la sonda optimizada (XO44) y la espectrometría de masas sin etiqueta para estudiar el compromiso de dasatinib.

Principales resultados:

• Las sondas de fluoruro de sulfonilo etiquetan covalentemente una amplia gama de quinasas endógenas.
• La sonda optimizada 2 (XO44) modificó hasta 133 quinasas, compitiendo con el ATP intracelular.
• Cuantificación precisa de la unión de dasatinib a objetivos específicos de la quinasa en las concentraciones pertinentes.

Conclusiones:

• Las sondas de fluoruro de sulfonilo dirigidas a la lisina son herramientas efectivas para aplicaciones quimioproteómicas.
• Este enfoque permite una medición precisa de la acción del fármaco en las células vivas.
• Facilita la comprensión de la selectividad y eficacia de los inhibidores de la quinasa.