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Because the DNA segments are cut and reorganized in a direction-specific manner, site-specific recombination has emerged as an efficient genetic engineering technique. Flippase and Cyclization recombinases or Flp and Cre, respectively, are two members of the tyrosine recombinase family derived from bacteriophages, that are used to mediate site-specific DNA insertions, deletions, and targeted expression of proteins in mammalian cell lines.
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Chromatin Modification in iPS Cells

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  • 1Centre for Epigenetics and Disease Prevention, Institute of Biosciences and Technology, Department of Molecular and Cellular Medicine, College of Medicine, Texas A&M University , 2121 W Holcombe Boulevard, Houston, Texas 77030, United States.

Journal of the American Chemical Society
|March 16, 2017
PubMed
Resumen

Los investigadores desarrollaron una enzima split-TET2 controlable para el control temporal de la oxidación del ADN. Esta herramienta ayuda a estudiar la epigenética y el vínculo entre la hidroximetilación del ADN y la accesibilidad de la cromatina en los mamíferos.

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Área de la Ciencia:

  • La epigenética y la biología molecular
  • Modificación del ADN y vías de desmetilación

Sus antecedentes:

  • La familia de enzimas de translocación Ten-eleven (TET) es crucial para la desmetilación activa del ADN mediante la oxidación de la 5-metilcitosina (5mC).
  • Comprender la regulación dinámica de la oxidación de 5mC y su impacto en los procesos celulares es esencial.

Objetivo del estudio:

  • Diseñar un sistema TET2 dividido inducible químicamente para el control temporal preciso de la oxidación de 5mC en células de mamíferos.
  • Investigar la relación entre la dinámica de la hidroximetilación del ADN y la accesibilidad de la cromatina.

Principales métodos:

  • Diseñar un sistema de enzimas TET2 dividido que permita la activación inducible.
  • Utilizando el sistema para manipular los niveles de oxidación de 5mC en células de mamíferos.
  • Evaluación de la correlación entre la hidroximetilación inducida del ADN y los cambios en la accesibilidad de la cromatina.

Principales resultados:

  • Desarrollo exitoso de un sistema TET2 dividido controlado temporalmente.
  • Demostración de la capacidad del sistema para inducir la oxidación 5mC y la posterior remodelación epigenética.
  • Pruebas que apoyan una correlación entre la hidroximetilación del ADN y la accesibilidad de la cromatina.

Conclusiones:

  • El sistema TET2 dividido inducible químicamente proporciona una herramienta poderosa para estudiar la dinámica del epigenoma.
  • Esta tecnología permite la investigación de las relaciones genotipo-fenotipo sin alteración genética.
  • La herramienta tiene amplias aplicaciones en la interrogación de sistemas celulares y procesos biológicos.