Fluoromódulos que consisten en un Aptamer de ARN promiscuo y tintes de cianuro fluorogénico rojo o azul: selección,...

Área de la Ciencia:

• Biología molecular
• Biotecnología
• Biología Química

Sus antecedentes:

• Los aptameros de ARN son moléculas de ácido nucleico seleccionadas para la unión específica a los objetivos.
• Los colorantes de cianina son fluoróforos ampliamente utilizados en imágenes biológicas.
• El desarrollo de nuevas sondas de imagen con propiedades sintonizables es crucial para la biología celular.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar un nuevo aptamer de ARN con capacidades de fluorescencia de doble color.
• Para crear un aptamer bifuncional para el etiquetado de receptores de superficie celular objetivo.
• Para demostrar la utilidad del aptamer para distinguir la superficie celular y los receptores internalizados.

Principales métodos:

• Evolución sistemática de los ligandos por enriquecimiento exponencial (SELEX) para la selección de colorantes de cianina.
• Caracterización de la cinética de unión entre el aptamer y el tinte (K_D) y las propiedades fotofísicas (rendimiento cuántico, fotostabilidad).
• Fusión del aptamer de unión al tinte con un aptamer específico del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR).

Principales resultados:

• Se identificó un único aptamer de ARN que se une tanto al dimetilindole rojo (DIR) como al oxazol tiazol azul (OTB) con afinidad submicromolar.
• Los complejos de colorantes de aptamer resultantes (módulos fluorados) muestran una emisión de fluorescencia ajustable y una alta estabilidad fotográfica.
• El aptamer bifuncional etiquetó con éxito el EGFR de la superficie celular en células de mamíferos.
• El cambio in situ del color de fluorescencia (azul/rojo) se logró cambiando el tinte unido.
• El sistema permitió la diferenciación entre la superficie celular y el EGFR internalizado basado en el tiempo de adición de colorante.

Conclusiones:

• El aptamer de ARN promiscuo ofrece una plataforma versátil para imágenes de fluorescencia de doble color.
• El aptamer bifuncional permite el etiquetado dirigido y el seguimiento dinámico de los receptores de la superficie celular.
• Esta tecnología proporciona un enfoque novedoso para distinguir la localización y la dinámica de los receptores en las células vivas.