Elucidación de la actividad epimerasa del grupo metílico críptico de los dominios de deshidratasa de las sintetasas...

Área de la Ciencia:

• La bioquímica
• Biología molecular
• Enzimología

Sus antecedentes:

• Los dominios de la deshidratasa (DH) son componentes de las policetidas sintasas (PKS).
• Estos dominios a menudo están asociados con la producción de intermedios epimerizados en la biosíntesis de policetidos.
• Las funciones enzimáticas precisas de algunos dominios DH siguen siendo crípticas.

Objetivo del estudio:

• Investigar las actividades enzimáticas intrínsecas de dominios específicos de deshidratasa dentro de los sistemas de policetida sintasa.
• Caracterizar las funciones epimerasa y deshidratasa de los dominios DH de la nanchangmicina y la nigericina PKS.
• Para determinar si los dominios DH con actividad conocida de deshidratasa también poseen funciones de epimerasa.

Principales métodos:

• Se utilizaron ensayos de intercambio de isótopos de equilibrio en tándem (EIX).
• Se utilizó un ensayo de epimerasa de módulos en tándem recientemente desarrollado.
• Se analizaron los dominios DH de la nanchangmicina (NanDH1, NanDH5, NanDH2) y la nigericina (NigDH1) de la PKS, así como la eritromicina sintasa (EryDH4).

Principales resultados:

• NanDH1, NanDH5 y NigDH1 exhibieron actividad epimerasa intrínseca.
• Estos tres dominios DH activos en epimerasa también poseían inesperadamente actividad intrínseca de deshidratasa.
• Los dominios convencionales de DH (EryDH4, NanDH2) demostraron actividad de epimerasa críptica.

Conclusiones:

• Los dominios de deshidratasa pueden poseer actividades duales, intrínsecas de epimerasa y deshidratasa.
• Los roles funcionales de los dominios DH en PKS son más diversos de lo que se entendía anteriormente.
• Este hallazgo tiene implicaciones para la comprensión de la biosíntesis de policetidos y la ingeniería de nuevos compuestos.