La activación de empalme por Rbfox requiere autoagregación a través de su dominio rico en tirosina

Área de la Ciencia:

• Biología molecular
• Biología celular
• La bioquímica

Sus antecedentes:

• Las proteínas de la familia Rbfox son reguladores clave del empalme alternativo.
• Las proteínas Rbfox funcionan dentro de un complejo más grande conocido como Large Assembly of Splicing Regulators (LASR).

Objetivo del estudio:

• Investigar la interacción entre las proteínas Rbfox y el complejo LASR.
• Determinar el papel del dominio terminal C de Rbfox (CTD) en la regulación del empalme y el ensamblaje complejo.
• Explorar las propiedades biofísicas del Rbfox CTD y su importancia funcional.

Principales métodos:

• Pruebas de co-inmunoprecipitación para el estudio de las interacciones proteicas.
• Ensayos de agregación in vitro para analizar las propiedades de autoensamblaje del Rbfox CTD.
• Ensayos de empalme para evaluar el impacto funcional del ensamblaje de CTD en el empalme de ARN.

Principales resultados:

• Las proteínas Rbfox interactúan con LASR a través de su CTD, que es esencial para la actividad de empalme.
• Una secuencia de baja complejidad (LC) dentro del Rbfox CTD, que contiene tirosinas repetidas, media el ensamblaje Rbfox/LASR de orden superior.
• Esta secuencia LC sufre agregación fibrosa espontánea y formación de hidrogel en solución.
• El ensamblaje Rbfox CTD es necesario para la activación del empalme e influye en las decisiones de empalme alternativas.
• A diferencia de los agregados patológicos, el conjunto Rbfox CTD es parte integral de su función normal en el empalme.

Conclusiones:

• El ensamblaje de orden superior de las proteínas Rbfox, mediado por su CTD, es un mecanismo crítico para regular el empalme alternativo.
• Este proceso de ensamblaje es distinto de la agregación patológica de proteínas observada en enfermedades neurodegenerativas.
• El ensamblaje nuclear de reguladores de empalme de orden superior, no solo el reclutamiento individual, dicta resultados alternativos de empalme.