Cambios conformacionales en tiempo real y orientación controlada de proteínas nativas dentro de un nanorreactor de...

Área de la Ciencia:

• La biofísica
• La bioquímica
• Nanotecnología

Sus antecedentes:

• Las conformaciones de las proteínas son críticas para las funciones biológicas.
• La comprensión de la dinámica de las proteínas requiere técnicas avanzadas de una sola molécula.

Objetivo del estudio:

• Demostrar el monitoreo en tiempo real de los cambios conformacionales de una sola proteína nativa utilizando corriente de iones de nanoporo.
• Investigar las propiedades y la orientación de las proteínas dentro de los nanoporos.

Principales métodos:

• Utilización de corriente iónica a través de un nanoporo para detectar cambios conformacionales en los dominios de unión al sustrato (SBD) de los importadores de cassette de unión al ATP.
• Comparación de las mediciones de nanoporo con la transferencia de energía de resonancia Förster de una sola molécula (smFRET) y las mediciones de conjunto.
• El control de la orientación de la proteína dentro del nanoporo a través de la modificación de la carga superficial.

Principales resultados:

• Las proteínas dentro del nanoporo exhiben propiedades similares a las del bulto.
• Se identificaron dos conformaciones libres de ligandos y dos de ligandos de proteínas SBD, con constantes cinéticas determinadas.
• La orientación de la proteína en el nanoporo puede ser controlada por la carga superficial.

Conclusiones:

• La tecnología de nanoporos permite estudios de una sola molécula de proteínas nativas en tiempo real.
• Los nanoporos pueden inmovilizar proteínas con orientación controlada para aplicaciones en nanorreactores.
• Potencial para los nanoporos en los dispositivos de detección multianalítica con adaptadores internos.