Una herramienta para la importación de trifosfatos nucleósidos naturales y no naturales en las bacterias

Área de la Ciencia:

• Biología molecular
• Biología sintética
• La bioquímica

Sus antecedentes:

• Los trifosfatos nucleósidos son moléculas celulares vitales, pero su estudio es desafiante debido a la estricta regulación y las dificultades en el etiquetado o la modificación.
• La biología sintética tiene como objetivo desarrollar nucleósidos trifosfatados no naturales para funciones celulares específicas.

Objetivo del estudio:

• Explorar la generalidad y la utilidad del transportador de trifosfato nucleósido PtNTT2 para la introducción de trifosfatos en las células.
• Realizar un estudio de la relación estructura-actividad de PtNTT2 para comprender su especificidad de sustrato.

Principales métodos:

• La expresión recombinante del transportador de trifosfato nucleósido de Phaeodactylum tricornutum (PtNTT2) en Escherichia coli.
• Ensayos de inhibición competitiva de la absorción para caracterizar la actividad del transportador con trifosfatos nucleósidos modificados.
• Ensayos de cromatografía líquida y espectrometría de masas en tándem (LC-MS/MS) para la medición directa de las importaciones de trifosfato.
• Importación de trifosfatos radiomarcados o modificados por 2'-fluoro y cuantificación de su incorporación al ADN y al ARN.

Principales resultados:

• PtNTT2 facilita la importación de varios trifosfatos nucleósidos naturales y modificados en las células.
• El estudio de la relación estructura-actividad aclaró la preferencia del transportador por las modificaciones de nucleobasa, azúcar y trifosfato.
• Se ha demostrado la incorporación exitosa de trifosfatos modificados importados en ADN y ARN.

Conclusiones:

• PtNTT2 proporciona un método general para la introducción de nucleósidos trifosfatados deseados en las células.
• Este enfoque es valioso para diversas aplicaciones de biología molecular y sintética, incluido el estudio del metabolismo de nucleótidos y el desarrollo de nuevas terapias.