Plataforma de detección de ácido nucleico multiplexada y portátil con Cas13, Cas12a y Csm6

Área de la Ciencia:

• Biología molecular
• Biotecnología
• La genética

Sus antecedentes:

• La detección rápida de ácido nucleico es crucial para el diagnóstico clínico y la biotecnología.
• La plataforma SHERLOCK, que utiliza Cas13, permite la detección de ARN y ADN sensibles.

Objetivo del estudio:

• Introducir SHERLOCK versión 2 (SHERLOCKv2) con mejoras significativas.
• Para mejorar las capacidades de multiplexación, sensibilidad y lectura de la plataforma SHERLOCK.

Principales métodos:

• Integración de la multiplexación de cuatro canales utilizando enzimas CRISPR ortogonales.
• Detección cuantitativa hasta 2 concentraciones atomolares de entrada.
• Combinación de Cas13 con Csm6 para un aumento de 3,5 veces la sensibilidad de la señal.
• Desarrollo de una lectura de flujo lateral para una detección simplificada.

Principales resultados:

• SHERLOCKv2 logró la multiplexación de cuatro canales en una sola reacción.
• Las mediciones cuantitativas demostraron una sensibilidad tan baja como 2 atomolares.
• La combinación Cas13-Csm6 aumentó significativamente la sensibilidad de la señal.
• Las lecturas de flujo lateral permitieron la detección del ARN del virus Dengue/Zika y las mutaciones del paciente.

Conclusiones:

• SHERLOCKv2 representa un avance significativo en la tecnología de detección de ácido nucleico.
• La plataforma es multiplejable, portátil, rápida y cuantitativa.
• SHERLOCKv2 muestra potencial para diversas aplicaciones de diagnóstico y biotecnología.