Entrega mediada por receptores de la endonucleasa CRISPR-Cas9 para la edición de genes específicos del tipo de célula

Área de la Ciencia:

• Biología molecular
• La genética
• Biotecnología

Sus antecedentes:

• Los sistemas CRISPR-Cas ofrecen una edición precisa del genoma, pero carecen de métodos de entrega específicos.
• La administración selectiva de células y tejidos es crucial para el avance de la investigación y las aplicaciones clínicas de CRISPR.

Objetivo del estudio:

• Diseñar y evaluar las proteínas CRISPR-Cas9 diseñadas con ligandos del receptor de la glicoproteína asiática (ASGPrL) para la captación celular dirigida.
• Para demostrar la edición de genes específica del tipo de célula mediada por el receptor in vitro.

Principales métodos:

• Las proteínas Cas9 de Streptococcus pyogenes diseñadas con ligandos ASGPr (RNP de Cas9-ASGPrL).
• Utilizó RNP Cas9-ASGPrL marcado fluorescentemente para imágenes de células vivas en líneas celulares hepáticas (HEPG2 y SKHEP).
• Evaluación de la eficacia de la edición de genes en presencia de un péptido endosómico.

Principales resultados:

• Cas9-ASGPrL RNP mostró una internalización preferente en las células HEPG2 que expresan ASGPr en comparación con las células SKHEP de control.
• Se ha demostrado una endocitosis mediada por ASGPr y una acumulación de RNP en las células diana.
• Se ha logrado una edición genética específica del tipo de célula facilitada por el receptor sin electroporación ni reactivos de transfección.

Conclusiones:

• La administración mediada por receptores de enzimas de edición del genoma es una estrategia viable para la edición de genes selectivos de células.
• Este enfoque proporciona una base para el desarrollo de la edición de genes hepatoselectivos in vivo.