Un sistema anfitrión-vector de mamíferos que regula la expresión y la amplificación de los genes transfectados por...

Área de la Ciencia:

• Biología Molecular Biología Molecular
• Virología Virología.
• Biología celular Biología celular.

Sus antecedentes:

• La transformación del virus simio 40 (SV40) es crucial para los estudios de replicación del ADN.
• Los mutantes sensibles a la temperatura son herramientas valiosas para estudiar la función de los genes.
• El control de la replicación del ADN del vector es esencial para la manipulación genética.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar células simiescas con regulación dependiente de la temperatura de la replicación del ADN vectorial.
• Para caracterizar las líneas celulares (células ts COS) que expresan el antígeno SV40 T grande térmolable.
• Establecer un sistema para el mantenimiento controlado del ADN episomal y vectorial integrado.

Principales métodos:

• Aislamiento y caracterización de células simiescas transformadas con SV40.
• Utilizando la repetición terminal larga del virus del sarcoma de Rous para el control transcripcional.
• Evaluación de la complementación de los mutantes del gen SV40 A.
• Evaluación de la replicación del ADN del vector a diferentes temperaturas (33°C frente a 40°C).

Principales resultados:

• Líneas celulares COS establecidas que exhiben control de replicación dependiente de la temperatura.
• Se han demostrado altos niveles de producción de antígenos T grandes termoábeles.
• Complementación confirmada de los mutantes del gen SV40 A.
• Apoyo demostrado para la replicación del vector que contiene el origen SV40 a 33°C, pero no a 40°C.

Conclusiones:

• Las células ts COS proporcionan un nuevo sistema para regular la replicación del ADN vectorial.
• La modulación dependiente de la temperatura de la actividad del antígeno T permite el control del número de copias de ADN del plásmido.
• Las secuencias de vectores seleccionables se pueden mantener como ADN integrado o episomas.