La clonación de expresión de un receptor homing de linfocitos cDNA: la ubiquitina es la especie reactiva

Área de la Ciencia:

• Inmunología Inmunología.
• Biología Molecular Biología Molecular
• Biología celular Biología celular.

Sus antecedentes:

• El receptor de la superficie celular de los linfocitos para las venas endoteliales altas (VEH) en los ganglios linfáticos periféricos es reconocido por el anticuerpo monoclonal MEL-14.
• La ubiquitina es una proteína involucrada en varios procesos celulares, incluyendo la degradación y regulación de las proteínas.

Objetivo del estudio:

• Investigar la identidad molecular del receptor HEV reconocido por MEL-14.
• Para entender el papel de la ubiquitina en la regulación de la expresión del receptor HEV.

Principales métodos:

• Cribado de las bibliotecas de expresión de ADNc con anticuerpos MEL-14.
• Caracterización de los clones de ADNc que codifican la ubiquitina.
• Análisis de la expresión de ubiquitina en líneas celulares positivas y negativas de receptores HEV.
• Hibridación de ARN y análisis de secuencia de ADNc de poliubiquitina.

Principales resultados:

• MEL-14 reconoció un determinante antigénico en la ubiquitina, específicamente un péptido de 13 aminoácidos en el extremo carboxilo.
• Este determinante no se detectó en la ubiquitina intacta, no desnaturalizada u otras proteínas ubiquitinadas.
• Los clones de ADNc identificados con MEL-14 codificaban ubiquitinas repetidas en tándem, y carecían de una secuencia líder para la exportación a la superficie celular.
• Los niveles de ARNm de ubiquitina no se correlacionaron con la expresión del receptor HEV, lo que sugiere una regulación post-transcripcional.

Conclusiones:

• El epítopo MEL-14 en la ubiquitina depende de su entorno local y la modificación post-traducional.
• Es probable que la regulación del receptor HEV esté controlada por la expresión del polipéptido central o su estado de ubiquitinación, no por la transcripción del gen de la ubiquitina.