Identificación y secuencia de un gen requerido para una escisión de ADN regulada en el desarrollo en Anabaenaena

Área de la Ciencia:

• Biología Molecular Biología Molecular
• Genética La genética.
• Microbiología Microbiología.

Sus antecedentes:

• Las cianobacterias Anabaena poseen un elemento de ADN de 11 kb dentro de la región de codificación del gen nifD.
• Este elemento se extirpa durante la diferenciación en heterocitos fijadores de nitrógeno a través de la recombinación específica del sitio.

Objetivo del estudio:

• Para investigar el mecanismo de la escisión de elementos de ADN de 11 kb en Anabaena.
• Desarrollar un ensayo para estudiar este proceso de escisión en un sistema heterólogo, Escherichia coli.
• Para identificar las regiones de ADN responsables de la escisión.

Principales métodos:

• Propagación de fragmentos de ADN de Anabaena en E. coli.
• Desarrollo de un ensayo de escisión basado en la transposición de mini-Mu-lac en E. coli.
• Mutagénesis de inserción y deleción del elemento de 11 kb.
• Estudios de complementación utilizando un fragmento de 6 kb.

Principales resultados:

• Se observó recombinación específica del sitio y escisión del elemento de 11 kb en E. coli.
• Se estableció un ensayo de E. coli, utilizando la pérdida del gen lac para la detección.
• La mutagenesis identificó una región específica dentro del elemento esencial para la escisión.
• Un fragmento de 6 kb que contiene un marco de lectura abierto complementó las mutaciones en la región de escisión.

Conclusiones:

• La escisión del elemento de ADN de 11 kb en Anabaena está mediada por la recombinación específica del sitio.
• Este proceso puede ser estudiado y manipulado en E. coli, facilitando el análisis genético.
• Una región específica y un marco de lectura abierto contra-transcrito están involucrados en el mecanismo de escisión.