Edición in vivo de CRISPR sin mutaciones fuera del objetivo detectables en todo el genoma

Área de la Ciencia:

• Biotecnología
• La genética
• Biología molecular

Sus antecedentes:

• La edición del genoma CRISPR-Cas ofrece un potencial terapéutico, pero requiere la identificación de mutaciones fuera del objetivo para la seguridad clínica.
• En la actualidad no existe un método validado para detectar con fiabilidad in vivo mutaciones fuera del objetivo, lo que dificulta la traducción clínica.

Objetivo del estudio:

• Introducir una estrategia de alta sensibilidad, la verificación in vivo de objetivos fuera del objetivo (VIVO), para identificar de manera robusta los efectos fuera del objetivo de las nucleasas CRISPR-Cas en todo el genoma in vivo.
• Evaluar la frecuencia y el impacto de las mutaciones fuera del objetivo inducidas por las nucleasas CRISPR-Cas in vivo.

Principales métodos:

• Desarrollo y aplicación de la estrategia de verificación in vivo fuera de los objetivos (VIVO).
• Utilizando un ARN guía deliberadamente promiscuo para probar la sensibilidad de VIVO en la detección de mutaciones fuera del objetivo en hígados de ratón.
• El uso de VIVO para evaluar la seguridad de ARN guía diseñados adecuadamente para la edición in vivo.

Principales resultados:

• Las nucleasas CRISPR-Cas pueden inducir mutaciones sustanciales fuera del objetivo en hígados de ratón cuando se utiliza un ARN guía promiscuo.
• Los ARN guía diseñados adecuadamente permiten una edición eficiente in vivo en hígados de ratón sin mutaciones fuera del objetivo detectables.
• VIVO demuestra ser un método sensible y robusto para el análisis de todo el genoma fuera del objetivo in vivo.

Conclusiones:

• La estrategia VIVO proporciona un método confiable para definir y cuantificar los efectos fuera del objetivo de las nucleasas de edición de genes en organismos enteros.
• El diseño cuidadoso del ARN guía es crucial para lograr una edición genética segura y efectiva in vivo.
• VIVO ofrece un plan para desarrollar estrategias terapéuticas más seguras que utilizan la edición de genes in vivo.