Las sondas de ubiquitina basadas en la actividad celular permiten el perfil intracelular de las deubiquitinasas...

Área de la Ciencia:

• La bioquímica
• Biología celular
• Biología Química

Sus antecedentes:

• Las deubiquitinasas (DUB) son enzimas cruciales involucradas en numerosos procesos celulares.
• Las sondas basadas en la actividad de DUB basadas en ubiquitina (Ub) a menudo carecen de permeabilidad celular, lo que limita los estudios a los lisados celulares.
• La lisis celular puede interrumpir la organización celular y alterar la actividad DUB, lo que dificulta las investigaciones fisiológicamente relevantes.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar nuevas ABP DUB permeables a las células para el perfilado intracelular de la actividad DUB.
• Para permitir el estudio de los DUB y sus funciones dentro de las células vivas intactas.
• Avanzar en la investigación de los DUB en contextos celulares y apoyar los esfuerzos de descubrimiento de fármacos.

Principales métodos:

• Se utilizó un enfoque semisintético para crear sondas DUB modulares basadas en ubiquitina con ojivas reactivas.
• Los péptidos que penetran en las células (CPPs), específicamente la poliarginina cíclica (cR10), se emplearon para mejorar la administración intracelular de DUB ABPs.
• La microscopia de fluorescencia de células vivas confirmó la entrega de la sonda; se utilizaron la inmunocaptura y la espectrometría de masas para el perfil de DUB en células HeLa intactas.

Principales resultados:

• Se generó y validó con éxito una nueva clase de ABP DUB permeables a las células.
• La poliarginina cíclica (cR10) demostró una mayor liberación intracelular de DUB ABPs en comparación con la TAT.
• El perfilado intracelular de DUB en células HeLa intactas identificó DUBs activos, y las sondas se utilizaron para evaluar la actividad inhibidora in situ.

Conclusiones:

• Las ABP DUB permeables a las células ofrecen una herramienta poderosa para investigar las DUB en su entorno celular nativo.
• Esta tecnología facilita una comprensión más profunda de las funciones DUB y las vías celulares.
• Las sondas desarrolladas son prometedoras para avanzar en el descubrimiento de fármacos dirigidos a los DUB humanos.