La iniciación ineficiente de la traducción causa la terminación prematura de la transcripción en el gen lacZ

Área de la Ciencia:

• Biología Molecular Biología Molecular
• Bacteriología Bacteriología.
• Genética La genética.

Sus antecedentes:

• La polaridad transcripcional afecta la expresión génica en las bacterias.
• Los sitios de unión del ribosoma influyen en la iniciación de la traducción y la estabilidad del ARNm.
• Se sabe que la proteína N lambda del fago afecta la terminación de la transcripción.

Objetivo del estudio:

• Investigar la relación entre la carga ribosómica y la terminación de la transcripción en E. coli.
• Determinar el papel de la proteína N lambda del fago en la superación de la polaridad transcripcional.
• Para aclarar el mecanismo de terminación prematura de la transcripción.

Principales métodos:

• Construcción de plásmidos de expresión con el gen lacZ bajo el promotor de fagos lambda PL.
• Utilizando diferentes sitios de unión del ribosoma para variar la iniciación de la traducción.
• Comparación de la síntesis de ARNm lacZ en huéspedes normales de E. coli versus huéspedes que expresan la proteína N. lambda del fago.

Principales resultados:

• En huéspedes normales, los niveles de ARNm lacZ variaron significativamente (100 veces) con diferentes sitios de unión al ribosoma.
• En los huéspedes con proteína N lambda del fago, todos los vectores produjeron cantidades similares de ARNm lacZ de longitud completa.
• Las diferencias en la expresión de la beta-galactosidasa se mantuvieron a pesar de los niveles uniformes de ARNm en presencia de la proteína N.

Conclusiones:

• La velocidad de carga del ribosoma impacta directamente en la continuación de la transcripción a través del gen lacZ.
• El espacio extendido entre la ARN polimerasa y los ribosomas puede causar polaridad al promover la terminación prematura.
• La naturaleza condicional de la terminación sugiere la participación del factor de terminación Rho.