Resolución de minicromosomas lineales con extremos de horquilla de plásmidos circulares que contienen las uniones de...

Área de la Ciencia:

• Virología Virología.
• Biología Molecular Biología Molecular
• Genética La genética.

Sus antecedentes:

• El ADN del virus Vaccinia existe como genomas de unidad de longitud dentro de formas concatémricas intracelulares.
• Los extremos de las moléculas maduras de ADN del virus de la vacuna en las partículas infecciosas presentan bucles de horquilla.
• Estos bucles de horquilla son copias dúplex que se encuentran en las uniones que separan los genomas de longitud unitaria en concatémeres.

Objetivo del estudio:

• Para investigar el papel de los concatémeres de ADN del virus de la vacuna como intermediarios replicativos.
• Para entender el mecanismo que genera la variación de la secuencia (flip-flop) en el ADN del virus de la vacuna.
• Identificar los requisitos para la resolución del ADN concatémero en formas maduras del genoma.

Principales métodos:

• Replicación de plásmidos circulares de E. coli que contienen fragmentos de unión palindrómica del virus de la vacuna en células infectadas por el virus de la vacuna.
• Análisis de la resolución del plásmido en minicromosomas lineales.
• Prueba del efecto de la longitud conjunta del concatémero (mínimo 250 bp) y el tipo de célula (infectado vs. no infectado).

Principales resultados:

• Los plásmidos replicados y disueltos en minicromosomas lineales con ADN del virus de la vacuna tienen horquillas en los extremos de las células infectadas.
• La resolución falló cuando la articulación del concatémero estaba por debajo de 250 bp.
• La resolución no se produjo en células no infectadas, lo que pone de relieve la necesidad de factores virales.

Conclusiones:

• Los concatémeres de ADN del virus Vaccinia funcionan como intermediarios de replicación.
• Las características estructurales específicas del ADN y los factores virales de acción trans son necesarios para la resolución del concatémero.
• Este proceso explica la generación de la variación de la secuencia de flip-flop en el genoma del virus de la vacuna.