Los tintes permeables a la membrana y sensibles al medio ambiente generan biosensores dentro de las células vivas

Área de la Ciencia:

• Biología Química
• Imágenes moleculares
• Biología celular

Sus antecedentes:

• Los tintes fluorescentes sensibles al medio ambiente son herramientas valiosas para estudiar la dinámica de las proteínas en las células vivas.
• Los métodos actuales para introducir conjugados de proteína de colorante en las células son invasivos y limitan las aplicaciones.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar un método para la introducción de tintes fluorescentes sensibles al medio ambiente en las células vivas sin perturbación.
• Para permitir el etiquetado celular de proteínas utilizando estos nuevos tintes y la mutagenesis de aminoácidos no naturales.

Principales métodos:

• Modificación de un biosensor fluorescente conocido para crear tintes permeables a la membrana con grupos reactivos (azida, alquina, ácido carboxílico).
• Incorporación de aminoácidos no naturales (AUA) para la fijación de colorantes dentro de las células vivas.
• Demostración del uso del colorante mero166 para el etiquetado de las proteínas Cdc42 y G9a.

Principales resultados:

• Desarrolló tintes brillantes de larga longitud de onda (mero166, mero167, mero76) que pueden atravesar las membranas celulares.
• Se ha demostrado con éxito el etiquetado intracelular de AUA para crear biosensores para Cdc42.
• Creó una sonda permeable a la membrana usando mero166 para rastrear la localización de la metiltransferasa G9a del ADN.

Conclusiones:

• Este nuevo enfoque supera las limitaciones de las técnicas de carga de tinte anteriores.
• Proporciona una estrategia versátil para crear biosensores dirigidos y sensibles al medio ambiente en células vivas.
• Amplia el uso práctico de tintes sintéticos para el estudio de los procesos celulares.