Mantenimiento funcional a largo plazo de los hepatocitos humanos primarios in vitro

Área de la Ciencia:

• Hepatología
• Biología celular
• Virología

Sus antecedentes:

• Las células terminalmente diferenciadas, particularmente los hepatocitos, son difíciles de mantener in vitro.
• Los métodos existentes a menudo no conservan la función y las características específicas de los hepatocitos durante períodos prolongados.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar un método para el mantenimiento in vitro a largo plazo de los hepatocitos humanos primarios (PHH).
• Establecer un modelo in vitro robusto para el estudio de la infección por el virus de la hepatitis B (VHB) y para el descubrimiento de medicamentos antivirales.

Principales métodos:

• Modulación de las vías de señalización celular mediante una combinación de cinco sustancias químicas (5C).
• Cultivo de PHH con el cóctel químico 5C.
• Evaluación de los perfiles de expresión génica de la PHH y las funciones específicas de los hepatocitos.
• Infección de PHH cultivados con 5C con VHB y seguimiento durante 4 semanas.

Principales resultados:

• Se ha logrado el mantenimiento in vitro a largo plazo de las PHH utilizando el enfoque 5C.
• Los PHH cultivados con 5C mostraron una expresión génica y funciones similares a las de los hepatocitos recién aislados.
• Recapituló con éxito el ciclo completo de infección por HBV in vitro, incluyendo la producción de partículas virales y la formación de cccDNA.
• Se ha demostrado una infección sostenida por el VHB durante un máximo de 4 semanas en los PHH cultivados.

Conclusiones:

• Un enfoque químico (5C) mantiene eficazmente los hepatocitos humanos primarios funcionales in vitro.
• Este método proporciona una plataforma estable para estudios a largo plazo de la infección por el VHB.
• El sistema desarrollado es adecuado para investigar la biología celular del VHB y para el cribado de fármacos antivirales.