Descubrimiento rápido de sondas covalentes mediante cribado de fragmentos de electrofilos

Área de la Ciencia:

• Biología química
• Descubrimiento de drogas
• Cribado por fragmentos

Sus antecedentes:

• Las sondas covalentes ofrecen una potencia y una duración superiores, pero son difíciles de descubrir.
• Los fragmentos electrófilos, aunque potencialmente poderosos, a menudo carecen de selectividad.
• Los métodos de cribado de fragmentos anteriores están limitados por la baja afinidad de los aglutinantes reversibles.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar un método práctico y eficiente para el descubrimiento de ligandos covalentes selectivos.
• Para superar el desafío de selectividad asociado con los fragmentos electrófilos.
• Para identificar nuevas sondas covalentes para objetivos proteicos desafiantes.

Principales métodos:

• Construcción y caracterización de una biblioteca de 993 miembros de fragmentos ligeramente electrófilos.
• Desarrollo de un ensayo de reactividad del tiol de alto rendimiento para la caracterización de fragmentos.
• Evaluación de la biblioteca contra 10 proteínas que contienen cisteína, seguida de una cristalografía de alto rendimiento.

Principales resultados:

• Se demostró que los electrófilos leves son selectivos, y los fragmentos altamente reactivos son raros.
• El enfoque de cribado dio resultados positivos para la mayoría de los objetivos de proteínas analizados.
• Se desarrollaron rápidamente sondas covalentes potentes y selectivas para OTUB2 y NUDT7, enzimas sin inhibidores conocidos previos.

Conclusiones:

• El cribado por fragmentos electrofílicos es una estrategia viable y eficiente para el descubrimiento de ligandos covalentes.
• Los electrófilos leves se pueden emplear con éxito para lograr la selectividad del objetivo.
• Este enfoque permite la identificación rápida de nuevas sondas covalentes para objetivos enzimáticos.