Los residuos de aspartato lejos del sitio activo impulsan la selección del sustrato de la transferasa O-GlcNAc

Área de la Ciencia:

• La bioquímica
• Biología molecular
• Biología celular

Sus antecedentes:

• O-GlcNAc es una modificación crucial después de la traducción que regula numerosos procesos celulares.
• Los niveles elevados de O-GlcNAc están relacionados con la progresión del cáncer.
• La O-GlcNAc transferasa (OGT) es la única enzima responsable de la O-GlcNAcilación en el nucleocitoplasma.

Objetivo del estudio:

• Aclarar el mecanismo de selección del sustrato por la enzima OGT.
• Identificar los residuos específicos dentro del OGT que determinan la especificidad del sustrato.
• Comprender cómo la estructura de la OGT influye en la glicosilación de las proteínas.

Principales métodos:

• Se utilizó la tecnología de microarrays de proteínas para el cribado de alto rendimiento.
• Se ha realizado un perfil de glucosilación en todo el proteoma.
• Mutagénesis dirigida al sitio para alterar los residuos de aspartato conservados en el dominio TPR de OGT.

Principales resultados:

• Se identificaron residuos de aspartato conservados dentro de la luz de repetición del tetratricopéptido (TPR) de la OGT como críticos para la selección del sustrato.
• Se ha demostrado que la mutación de estos residuos de aspartato en alaninas altera la selectividad del sustrato de la OGT.
• Se observó un aumento inesperado en las tasas de glicosilación de proteínas tras la mutación de estos residuos.

Conclusiones:

• Los residuos de aspartato conservados en el dominio OGT TPR son factores clave para el reconocimiento del sustrato.
• Se propone un modelo en el que los contactos de dominio TPR determinan los sitios de glucosilación en los sustratos.
• Los resultados proporcionan una base para el diseño de inhibidores de la OGT y sustratos de ingeniería para estudios funcionales.