Imágenes en vivo mediadas por CRISPR de edición y transcripción del genoma

Área de la Ciencia:

• Biología molecular
• La genética
• Biología celular

Sus antecedentes:

• El seguimiento preciso del genoma en las células vivas es crucial para comprender la dinámica del ADN.
• Los métodos existentes a menudo carecen de la versatilidad o las capacidades de imagen en tiempo real necesarias para procesos celulares complejos.

Objetivo del estudio:

• Introducir la hibridación fluorescente in situ de células vivas CRISPR (LiveFISH) para un seguimiento robusto del genoma.
• Demostrar la capacidad de LiveFISH en varios tipos de células y para diversas aplicaciones genómicas.

Principales métodos:

• Utilizando oligonucleótidos fluorescentes y el interruptor de estabilidad del ARN guía CRISPR para la visualización del ADN.
• Aplicación de LiveFISH para detectar trastornos cromosómicos y rastrear rupturas de doble hebra de ADN.
• Combinando los sistemas Cas9 y Cas13 para imágenes simultáneas de ADN y ARN.

Principales resultados:

• LiveFISH rastreó con éxito múltiples loci genómicos en linfocitos T humanos.
• El método detectó con precisión trastornos cromosómicos como el síndrome de Patau en las células prenatales.
• Se visualizó el movimiento en tiempo real de las rupturas de doble cadena de ADN y las translocaciones cromosómicas.
• Se logró obtener imágenes simultáneas de transcripciones genómicas de ADN y ARN en células vivas.

Conclusiones:

• CRISPR LiveFISH ofrece una plataforma versátil y robusta para el seguimiento del genoma de células vivas.
• Este enfoque permite imágenes en tiempo real de eventos genómicos críticos que incluyen edición, transcripción y reordenamientos.
• LiveFISH tiene amplias aplicaciones en biología celular, genética y diagnóstico de enfermedades.