Las mutaciones oncogénicas recablean las vías de señalización cambiando el reclutamiento de proteínas a los sitios de...

Área de la Ciencia:

• Biología molecular
• Proteomía
• Las señales del cáncer

Sus antecedentes:

• La fosforilación de la tirosina es crucial para la señalización celular en la salud y la enfermedad.
• Los métodos existentes carecen de una anotación funcional de alto rendimiento de los sitios de fosfotirosina en los tejidos.
• La comprensión de las redes de señalización es vital para descifrar la fisiología (patho).

Objetivo del estudio:

• Desarrollar un enfoque de proteómica de interacción basado en la espectrometría de masas para la anotación funcional de sitios de fosfotirosina directamente en muestras de tejidos.
• Descifrar la red de señalización in vivo dependiente del factor de crecimiento epidérmico (EGF) en el tejido pulmonar.
• Asignar una función a los sitios de fosfotirosina regulados por el FEAG mediante la identificación de sus complejos de señalización de proteínas reclutados.

Principales métodos:

• Desarrolló y aplicó una estrategia de proteómica de interacción basada en la espectrometría de masas.
• Se cuantificaron más de 1.000 sitios de fosfotirosina en el tejido pulmonar estimulado por el FEG.
• Realizó más de 1.000 extracciones de fosfopéptidos seguidas de un análisis espectrométrico de masa rápido.

Principales resultados:

• Se ha cartografiado con éxito la red de señalización in vivo dependiente del FEAG en el tejido pulmonar, identificando más de 1.000 sitios de fosfotirosina.
• Determinación de los complejos de señalización de proteínas reclutados por los sitios de fosforosina regulados por el FEAG.
• Se demostró que las mutaciones cerca de los residuos de tirosina pueden recablear las redes de señalización del cáncer, identificando las propiedades oncogénicas de un mutante del EGFR del cáncer de pulmón.
• Se revelaron diferencias específicas del tejido en los interactores de proteínas a través de extracciones escalables de fosfopéptidos.

Conclusiones:

• El enfoque desarrollado proporciona una estrategia general para la anotación funcional de los sitios de fosforilación en los tejidos.
• Permite una visión mecanicista en profundidad de la reconfiguración oncogénica de las redes de señalización.
• Facilita el estudio de la fosforilación de la tirosina en diversos contextos fisiológicos y patológicos.