Selección de bibliotecas codificadas por ADN para objetivos de proteínas dentro y en células vivas

Área de la Ciencia:

• Biología Química
• Descubrimiento de drogas
• Biología molecular

Sus antecedentes:

• Las bibliotecas codificadas por ADN (DEL) son herramientas poderosas para identificar moléculas pequeñas que se unen a objetivos de proteínas.
• La selección de los DEL frente a las proteínas intracelulares o de la superficie celular en su entorno nativo sigue siendo un desafío.
• Los métodos actuales a menudo requieren proteínas activas purificadas, lo que limita el alcance de las proteínas objetivo.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar y validar un método novedoso para seleccionar los DEL frente a las proteínas objetivo dentro de las células vivas.
• Para permitir el descubrimiento de drogas para objetivos difíciles que son difíciles de expresar y purificar.
• Evaluar la unión de los DEL a objetivos tanto intracelulares como de superficie celular en un contexto biológicamente relevante.

Principales métodos:

• Generación de enlaces covalentes entre pequeñas moléculas codificadas por ADN y dianas de proteínas a través del etiquetado de afinidad.
• Utilizando una etiqueta en proteínas recombinantes para la copurificación de las bibliotecas codificadas con ADN etiquetadas.
• Emplear péptidos cíclicos que penetran en las células para facilitar la entrega de bibliotecas codificadas por ADN a través de las membranas celulares para la orientación intracelular.
• Selección de bibliotecas codificadas por el ADN contra objetivos de proteínas en células vivas.

Principales resultados:

• Selección exitosa de bibliotecas codificadas por ADN contra dianas de proteínas ubicadas en el citosol y en la superficie celular de células vivas.
• Demostrar el etiquetado de afinidad y la posterior copurificación como un mecanismo clave para la participación del objetivo.
• Validación de péptidos que penetran en las células para la entrega efectiva de bibliotecas codificadas en ADN en células vivas.
• El enfoque desarrollado permite evaluar la unión DEL en un entorno celular nativo.

Conclusiones:

• Este nuevo enfoque permite la selección de bibliotecas codificadas por ADN contra objetivos proteicos desafiantes en células vivas.
• El método supera las limitaciones de los enfoques tradicionales al apuntar a las proteínas en su contexto celular nativo.
• Esta estrategia expande significativamente la utilidad de las bibliotecas codificadas en ADN para el descubrimiento de fármacos y la investigación en biología química.