Selección de Aptameros con Grandes Sustituyentes Hidrofóbicos

Área de la Ciencia:

• La bioquímica
• Biología molecular
• Biología sintética

Sus antecedentes:

• Las polimerasas de ADN generalmente reconocen sustratos naturales de ADN.
• Modificar las bases del ADN puede alterar su reconocimiento y función.
• Las enzimas diseñadas ofrecen nuevas posibilidades para la manipulación del ácido nucleico.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar una polimerasa de ADN capaz de reconocer y sintetizar plantillas de ADN modificadas por 2'.
• Utilizar esta polimerasa para la selección de aptameros con nuevas funcionalidades.
• Explorar el potencial de las modificaciones hidrofóbicas en la estructura y actividad del aptamer.

Principales métodos:

• Evolución dirigida de una polimerasa de ADN (SFM4-3) para el reconocimiento de sustratos modificados por 2'.
• Síntesis de ADN modificado por 2'-azido utilizando SFM4-3.
• Haga clic en la química para unir grupos hidrofóbicos a la fracción 2'-azido.
• Selección de aptámero contra la elastasa de los neutrófilos humanos y el factor IXa.

Principales resultados:

• SFM4-3 reconoce y amplifica con éxito las plantillas de ADN 2' modificadas en condiciones estándar.
• Los aptámeros con grandes sustituyentes 2' hidrofóbicos fueron seleccionados utilizando SFM4- 3.
• Se demostró la unión de aptameros seleccionados a las proteínas objetivo: la elastasa de neutrófilos humanos y el factor IXa.
• La polimerasa diseñada facilita la creación de aptameros de ADN con núcleos hidrofóbicos similares a las proteínas.

Conclusiones:

• SFM4-3 permite la síntesis y la amplificación del ADN con diversas modificaciones hidrofóbicas 2'.
• Esta polimerasa de ingeniería es una herramienta poderosa para descubrir aptamers con nuevos pliegues y actividades.
• El enfoque abre nuevas vías para el desarrollo de terapias basadas en aptamer dirigidas a proteínas complejas.