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CRISPR/Cas9 Genome Editing01:28

CRISPR/Cas9 Genome Editing

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The CRISPR-Cas system serves as a bacterial defense mechanism against invading genetic elements such as viruses and plasmids, forming the foundation for its adaptation as a powerful genome-editing tool. Originally discovered in prokaryotes, this system has been repurposed to revolutionize genetic engineering across a wide range of organisms, including plants, animals, and humans. The core component, Cas9, is an endonuclease derived from Streptococcus pyogenes, capable of introducing...
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CRISPR and crRNAs02:53

CRISPR and crRNAs

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Bacteria and archaea are susceptible to viral infections just like eukaryotes; therefore, they have developed a unique adaptive immune system to protect themselves. Clustered regularly interspaced short palindromic repeats and CRISPR-associated proteins (CRISPR-Cas) are present in more than 45% of known bacteria and 90% of known archaea.
The CRISPR-Cas system stores a copy of foreign DNA in the host genome and uses it to identify the foreign DNA upon reinfection. CRISPR-Cas has three different...
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CRISPR01:59

CRISPR

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Genome editing technologies allow scientists to modify an organism’s DNA via the addition, removal, or rearrangement of genetic material at specific genomic locations. These types of techniques could potentially be used to cure genetic disorders such as hemophilia and sickle cell anemia. One popular and widely used DNA-editing research tool that could lead to safe and effective cures for genetic disorders is the CRISPR-Cas9 system. CRISPR-Cas9 stands for Clustered Regularly Interspaced...
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Conservative Site-specific Recombination and Phase Variation02:53

Conservative Site-specific Recombination and Phase Variation

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Because the DNA segments are cut and reorganized in a direction-specific manner, site-specific recombination has emerged as an efficient genetic engineering technique. Flippase and Cyclization recombinases or Flp and Cre, respectively, are two members of the tyrosine recombinase family derived from bacteriophages, that are used to mediate site-specific DNA insertions, deletions, and targeted expression of proteins in mammalian cell lines.
The recognition sites for Cre recombinase called LoxP...
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Carga selectiva y procesamiento de prespacers para una adaptación precisa de CRISPR

Sungchul Kim1, Luuk Loeff2, Sabina Colombo2

  • 1Kavli Institute of Nanoscience, Department of Bionanoscience, Delft University of Technology, Delft, The Netherlands. sungchulkim.kr@gmail.com.

Nature
|February 21, 2020
PubMed
Resumen

Los sistemas CRISPR-Cas utilizan el complejo Cas1-Cas2 para adquirir memoria de ADN extraño. Este estudio revela cómo Cas1-Cas2 selecciona fragmentos de ADN y utiliza exonucleasas DnaQ para recortarlos, asegurando la integración correcta del espaciador para la inmunidad procariótica.

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Área de la Ciencia:

  • Biología molecular
  • Microbiología
  • La genética

Sus antecedentes:

  • La inmunidad CRISPR-Cas proporciona a las procariotas una defensa contra elementos genéticos extraños.
  • El complejo Cas1-Cas2 es crucial para el establecimiento de la memoria inmune hereditaria a través de la adquisición de espaciadores.
  • Los mecanismos de selección e integración de prespacer por Cas1-Cas2 siguen siendo incompletamente entendidos.

Objetivo del estudio:

  • Elucidar el mecanismo por el cual Cas1-Cas2 selecciona precursores de prespacer de ADN extraño.
  • Identificar las enzimas involucradas en el procesamiento de los prespaceros para su integración.
  • Comprender cómo se logra la orientación correcta del espaciador durante la integración en el locus CRISPR.

Principales métodos:

  • Microscopía de fluorescencia de una sola molécula con alta resolución espacial y temporal.
  • Análisis de la selección de ADN por Cas1-Cas2 en varias formas (ssDNA, duplexos parciales).
  • Identificación de las exonucleasas DnaQ en la maduración del prespacer.

Principales resultados:

  • Cas1-Cas2 selecciona los precursores del prespacer en función de la longitud del ADN y la presencia de un motivo adyacente del protospacer (PAM).
  • Las exonucleasas de DnaQ procesan los precursores seleccionados en prespaceros maduros listos para la integración.
  • Cas1-Cas2 protege la secuencia PAM, lo que lleva a un recorte asimétrico y una orientación correcta del espaciador.

Conclusiones:

  • El estudio revela un mecanismo coordinado de selección de precursores prespacer y recorte de PAM por Cas1-Cas2.
  • Este proceso asegura la integración precisa de los espaciadores funcionales en los loci CRISPR para la inmunidad adaptativa.
  • Los hallazgos proporcionan información crítica sobre los mecanismos moleculares de la inmunidad adaptativa CRISPR-Cas.