Cuantificación específica de la secuencia de daño al ADN mutagénico a través de la amplificación por polimerasa con...

Área de la Ciencia:

• Biología molecular
• Biología Química
• La genómica

Sus antecedentes:

• El daño del ADN, incluidos los adductos de ADN de baja abundancia, puede causar errores de replicación y mutaciones.
• Los métodos actuales carecen de la capacidad de medir los adductos de ADN en ubicaciones genómicas específicas, lo que dificulta el estudio de la mutagénesis química.
• La disponibilidad limitada de nucleótidos artificiales para la detección de adductos de ADN restringe el análisis cuantitativo.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar una estrategia para la identificación específica del sitio, la localización y la cuantificación de los adductos de ADN mutagénico.
• Para crear un método para vincular la alquilación del ADN a la mutagénesis.
• Hacer avanzar las herramientas para la detección de adyuctos de ADN como biomarcadores potenciales del cáncer.

Principales métodos:

• Síntesis de un trifosfato de nucleótido artificial que se inserta en el ADN O6-carboximetil-guanina opuesto.
• Utilizando una polimerasa de ADN diseñada para la inserción selectiva de nucleótidos y la síntesis de ADN más allá del adducto.
• Establecimiento de un método espectrométrico de masa para cuantificar el nucleótido artificial incorporado.

Principales resultados:

• Se ha demostrado la inserción selectiva del nucleótido artificial opuesto a la O6-carboximetil-guanina mediante una polimerasa de ingeniería.
• Confirmado que el nucleótido artificial sirve como marcador para la presencia y ubicación genómica de O6-carboximetil-guanina.
• Se ha establecido un método cuantitativo de espectrometría de masas que muestra una relación lineal entre los niveles de nucleótido artificial incorporado y de O6-carboximetil-guanina.

Conclusiones:

• Se presentó una nueva estrategia para identificar, localizar y cuantificar los adductos de ADN O6-carboximetil-guanina mutagénicos.
• Herramientas avanzadas para el estudio de la mutagenesis química y la alquilación del ADN.
• Abrió el camino para la detección de adductos de ADN como biomarcadores de diagnóstico para la prevención del cáncer.