Construcción de congelamiento en un solo paso, sin envejecimiento de sal y sin tiol de bioprobas basadas en AuNP para...

Área de la Ciencia:

• Nanotecnología
• La bioconjugación
• Diagnóstico molecular

Sus antecedentes:

• La construcción tradicional de la sonda de ADN-AuNP requiere una modificación de tiol, lo que agrega complejidad y costo.
• Los métodos de etiquetado basados en la congelación existentes son rápidos, pero pueden verse obstaculizados por estructuras secundarias de ADN que afectan a la eficiencia de la sonda.

Objetivo del estudio:

• Evaluar y optimizar una secuencia de ADN etiquetada con poli (A) para un método de etiquetado basado en la congelación sin tiol.
• Desarrollar bioprobas basadas en AuNP convenientes y rentables (ADN-AuNP, ARN-AuNP, ADN-enzima-AuNP).
• Aplicar estas nuevas bioprobas en el avance de las estrategias de diagnóstico basadas en CRISPR.

Principales métodos:

• Se ha investigado el papel de la longitud de la base poli (A) en los extremos del ADN para el etiquetado basado en la congelación.
• Se evaluó el impacto de las estructuras secundarias del ADN en la eficiencia del etiquetado.
• Se han desarrollado bioprobas ADN-AuNP, ARN-AuNP y ADN-enzima-AuNP utilizando el método optimizado.
• Biosondas desarrolladas integradas en ensayos de diagnóstico CRISPR de colorimetría, fluorescencia y flujo lateral.

Principales resultados:

• Aproximadamente 10 bases de adenina (A) en los extremos de la secuencia son cruciales para un etiquetado eficiente.
• El aumento del número de bases poli (A) restauró con éxito el etiquetado para las secuencias propensas a la formación de estructuras secundarias.
• Se estableció un protocolo de etiquetado sin tiol en un solo paso, lo que redujo significativamente el costo y la complejidad.
• Demostró la utilidad de las bioprobas desarrolladas en plataformas de diagnóstico CRISPR fáciles de usar.

Conclusiones:

• El método optimizado basado en la congelación con etiqueta poly (A) proporciona un enfoque altamente eficiente, conveniente y de bajo costo para la construcción de bioprobas AuNP.
• Esta técnica de etiquetado sin tiol supera las limitaciones asociadas con las estructuras secundarias del ADN.
• Las bioprobas AuNP desarrolladas ofrecen plataformas versátiles para avanzar en diagnósticos sensibles y accesibles basados en CRISPR.