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Single-Strand DNA Binding Proteins01:03

Single-Strand DNA Binding Proteins

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For successful DNA replication, the unwinding of double-stranded DNA must be accompanied by stabilization and protection of the separated single strands of the DNA. This crucial task is performed by single-strand DNA-binding (SSB) proteins. They bind to the DNA in a sequence-independent manner, which means that the nitrogenous bases of the DNA need not be present in a specific order for binding of SSB proteins to it. The binding of SSB proteins straightens single-stranded DNA (ssDNA) and makes...
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Generación de aptámeres TNA biológicamente estables que funcionan con alta afinidad y estabilidad térmica

Matthew R Dunn, Cailen M McCloskey, Patricia Buckley1

  • 1U.S. Army CCDC Chemical Biological Center, APG, Maryland 21010, United States.

Journal of the American Chemical Society
|April 17, 2020
PubMed
Resumen

Este estudio introduce un nuevo ácido xeno-nucleico, el ácido α-l-treofuranosil (TNA), que es resistente a la digestión de la nucleasa. Los aptameros de TNA dirigidos a la transcriptasa inversa del VIH muestran una alta afinidad y estabilidad, ofreciendo potencial para nuevas herramientas diagnósticas y terapéuticas.

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Área de la Ciencia:

  • La bioquímica
  • Biología molecular
  • Química de los ácidos nucleicos

Sus antecedentes:

  • Los aptameros tienen aplicaciones biomédicas limitadas debido a su susceptibilidad a la degradación de la nucleasa.
  • Los ácidos xeno-nucleicos ofrecen potencial para una mayor estabilidad y funcionalidad.

Objetivo del estudio:

  • Desarrollar un sistema de aptamer resistente a la nucleasa utilizando el ácido nucleico α-l-treofuranosil (TNA).
  • Aislar y caracterizar los aptameros de TNA con una alta afinidad de unión a la transcriptasa inversa del VIH (RT del VIH).

Principales métodos:

  • Desarrollo de una polimerasa de TNA diseñada para la síntesis de aptamer.
  • Aislamiento de los aptameros de TNA dirigidos al VIH RT utilizando una estrategia de visualización.
  • Caracterización de la afinidad de unión (KD) y la estabilidad térmica.

Principales resultados:

  • Los aptameros de TNA demostraron una resistencia completa a la digestión de la nucleasa.
  • Los aptameros de TNA aislados se unen al VIH RT con una alta afinidad (KDs de 0,4- 4,0 nM).
  • Los aptameros de TNA mostraron una estabilidad térmica superior en comparación con los anticuerpos monoclonales.

Conclusiones:

  • Los aptameros TNA representan una alternativa biológicamente estable y altamente afín a los aptameros tradicionales.
  • La resistencia a la nucleasa y la estabilidad térmica de los aptameros de TNA son ventajosas para aplicaciones diagnósticas y terapéuticas.
  • Este sistema TNA proporciona una poderosa plataforma para el desarrollo de nuevos agentes biomédicos.