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Updated: Dec 23, 2025
Gene Knock-in by CRISPR/Cas9 and Cell Sorting in Macrophage and T Cell Lines
Published on: November 13, 2021
Orientación conjunta de Knockin para la ingeniería genómica de inmunoterapias celulares
Theodore L Roth1, P Jonathan Li2, Franziska Blaeschke2
1Medical Scientist Training Program, University of California, San Francisco, San Francisco, CA, USA; Biomedical Sciences Graduate Program, University of California, San Francisco, San Francisco, CA, USA; Department of Microbiology and Immunology, University of California, San Francisco, San Francisco, CA, USA; Diabetes Center, University of California, San Francisco, San Francisco, CA, USA; Innovative Genomics Institute, University of California, Berkeley, Berkeley, CA, USA.
Los investigadores desarrollaron una nueva tecnología de detección de knockin agrupada para probar rápidamente las construcciones genéticas para mejorar las terapias con células T. Este método identificó un nuevo receptor quimérico que mejoró el aclaramiento del tumor sólido in vivo.
Área de la Ciencia:
- Inmunología
- Biología molecular
- La genética
Sus antecedentes:
- La transferencia de células adoptivas utilizando células inmunes modificadas genéticamente es un enfoque prometedor de inmunoterapia contra el cáncer.
- La edición de genes CRISPR mejora las terapias celulares, pero se necesitan métodos de alto rendimiento para identificar construcciones genéticas óptimas para mejorar las funciones celulares primarias in vivo.
Objetivo del estudio:
- Desarrollar una tecnología de alto rendimiento para el cribado de construcciones de knockin genético en células T humanas primarias.
- Identificar nuevas modificaciones genéticas que mejoren la función de las células T para mejorar la inmunoterapia contra el cáncer.
Principales métodos:
- Desarrolló una tecnología para codificar y rastrear integraciones específicas de grandes plantillas de ADN no virales para pantallas knockin agrupadas en células T humanas primarias.
- Se aplicó el cribado de knockin agrupado al locus del receptor de células T (TCR) para evaluar la eficacia de la construcción génica.
- Se desarrolló la secuenciación conjunta de knockins (PoKI-seq) que integra el análisis del transcriptoma de una sola célula con la detección conjunta para medir la abundancia y el estado celular ex vivo e in vivo.
Principales resultados:
- Construcciones genéticas identificadas que mejoraron la aptitud de las células T in vitro e in vivo a través del cribado de knockin combinado.
- La plataforma PoKI-seq midió con éxito la abundancia y el estado celular ex vivo e in vivo.
- Nominó un nuevo receptor quimérico del factor de crecimiento transformador β (TGF-β) R2-41BB que demostró una mejor depuración del tumor sólido.
Conclusiones:
- La detección conjunta de knockins es una tecnología poderosa y adaptable para la reescritura de secuencias genéticas paralelas.
- Esta plataforma acelera el descubrimiento de programas de genes knockin efectivos para el desarrollo de terapias celulares avanzadas.
- El receptor quimérico TGF-β R2-41BB identificado muestra potencial para mejorar la inmunoterapia del tumor sólido.
