Detección de la distribución a nanoescala de los pares de proteínas por microscopía de superresolución dependiente de...

Área de la Ciencia:

• Biología celular
• La biofísica
• Imágenes moleculares

Sus antecedentes:

• Los procesos celulares dependen de las interacciones biomoleculares, lo que requiere visualización dentro de las células.
• Los ensayos de proximidad existentes producen señales limitadas por difracción, lo que dificulta el análisis a nanoescala.
• Los métodos actuales de co-localización de super-resolución corren el riesgo de falsos positivos debido a los límites de resolución óptica.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar un método de imágenes de súper resolución para la visualización precisa de las interacciones proteína-proteína in situ.
• Para desacoplar la detección de proximidad de los límites de resolución óptica en imágenes celulares.
• Mejorar la comprensión de la regulación celular a través de imágenes a nanoescala de las interacciones moleculares.

Principales métodos:

• El PAINT dependiente de la proximidad (PD-PAINT) utiliza construcciones de ADN para la detección de proximidad dependiente de la distancia.
• Los pares de proteínas etiquetadas se muestran utilizando DNA-PAINT, una técnica de súper resolución.
• Se realizaron simulaciones moleculares de grano grueso y validación experimental.

Principales resultados:

• PD-PAINT logra imágenes de subdifracción de pares de proteínas al desacoplar la detección de proximidad de la resolución óptica.
• El método se demostró en azulejos de ADN-origami y proteínas cardíacas en cardiomiocitos.
• PD-PAINT se integra con los protocolos de imágenes de súper resolución multiplexadas.

Conclusiones:

• PD-PAINT ofrece una alta especificidad, resolución y capacidades cuantitativas de imagen.
• Esta técnica hace avanzar las imágenes a nanoescala de las interacciones moleculares dentro de las células.
• PD-PAINT supera las limitaciones de los ensayos sensibles a la proximidad existentes para las imágenes celulares.