Detección ultrasensible de la actividad enzimática mediante matrices de moléculas individuales

Área de la Ciencia:

• La bioquímica
• Biología molecular
• Desarrollo de ensayos

Sus antecedentes:

• Los ensayos enzimáticos son cruciales para el diagnóstico, la proteómica y el descubrimiento de fármacos.
• Los métodos existentes a menudo carecen de suficiente sensibilidad analítica.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar un método ultra sensible para la detección de la actividad enzimática.
• Demostrar la aplicabilidad del método para el cribado de diversas enzimas e inhibidores.

Principales métodos:

• Se utilizaron matrices de molécula única (eSimoa) para la detección de la actividad enzimática.
• Substratos conjugados con cuentas paramagnéticas para el análisis de moléculas individuales.
• Se aplicó el ensayo a las proteínas cinasas, la telomerasa, SET7/9 y GalNAc-T.

Principales resultados:

• Se logró una sensibilidad sin precedentes en la detección de la actividad enzimática.
• Se han determinado con éxito las constantes de inhibición de bosutinib y dasatinib.
• Habilitado la medición de la actividad de la quinasa a nivel de una sola célula.

Conclusiones:

• El ensayo eSimoa es una plataforma sencilla, rápida y altamente sensible para la detección de enzimas.
• El método es extensible a una amplia gama de enzimas.
• Proporciona una herramienta prometedora para la investigación de enzimas y la detección de inhibidores.