Un sitio de unión c-erb-A en el gen de la hormona de crecimiento de la rata media la trans-activación por la hormona...

Área de la Ciencia:

• Endocrinología Molecular La Endocrinología Molecular
• Reglamento genético Reglamento genético.
• Función del receptor nuclear La función del receptor nuclear

Sus antecedentes:

• La hormona tiroidea (3,5,3-triiodotironina, T3) regula la transcripción génica, incluida la expresión génica de la hormona del crecimiento (GH) en las células pituitarias.
• La acción de T3 está mediada por receptores nucleares de T3 que se unen a los elementos reguladores del ADN, pero su purificación y sitios específicos de unión han sido difíciles de identificar debido a la baja abundancia.
• Estudios recientes identificaron los productos del gen c-erb-A como aglutinantes de la hormona tiroidea de alta afinidad con características de receptor.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar un método para detectar interacciones específicas del receptor T3 con el ADN.
• Para identificar la secuencia de ADN reconocida por los receptores T3 en el promotor del gen de la hormona del crecimiento (GH) en ratas.
• Investigar el papel del producto del gen c-erb-A en la mediación de la transcripción del gen GH regulado por T3.

Principales métodos:

• Desarrollo de un ensayo de unión al ADN del complejo avidina-biotina para detectar la unión al receptor T3 nuclear.
• Ensayos de transfección de oligonucleótidos en células GC2 de la hipófisis de rata para evaluar la regulación de T3.
• Ensayos de unión in vitro utilizando un producto de traducción in vitro del gen c-erb-A placentario humano.

Principales resultados:

• El ensayo de avidina-biotina detectó una unión específica de alta afinidad de los receptores T3 de la hipófisis de rata a la secuencia 5'CAGGGACGTGACCGCA3' ubicada 164 bp aguas arriba del sitio de inicio del gen GH de rata.
• Un oligonucleótido que contenía esta secuencia confería la regulación de T3 a un promotor heterólogo (timidina quinasa del virus del herpes simple) en las células transfectadas.
• La secuencia de ADN identificada se unió específicamente al producto genético placentario humano c-erb-A in vitro.

Conclusiones:

• El producto del gen humano c-erb-A es probablemente el mediador de los efectos transcripcionales de T3 en el gen GH.
• La secuencia de ADN identificada representa un elemento de respuesta T3 en el gen GH de la rata.
• Factores nucleares adicionales en las células pituitarias pueden modular la unión del receptor T3 al elemento de respuesta T3 del gen GH.