Purificación y clonación de una proteína de unión al ADN de la levadura que se une a los elementos silenciadores y...

Área de la Ciencia:

• Biología Molecular Biología Molecular
• Genética de la levadura Genética de la levadura
• El Reglamento de transcripción es el Reglamento de transcripción.

Sus antecedentes:

• Una proteína de unión al ADN, RAP1 (anteriormente SBF-E), interactúa con los sitios reguladores del ADN en la levadura.
• RAP1 no está codificado por los reguladores conocidos de los loci silenciosos.
• La función precisa de RAP1 en la regulación génica aún no se ha aclarado completamente.

Objetivo del estudio:

• Para purificar la proteína RAP1 y aislar su gen.
• Para investigar el papel de RAP1 en la regulación transcripcional.
• Para determinar si RAP1 puede funcionar tanto en la activación como en la represión de genes.

Principales métodos:

• Cromatografía de afinidad de ADN para la purificación de proteínas.
• Lambda gt11 selección de la biblioteca genómica utilizando anticuerpos para el aislamiento de genes.
• Disrupción genética para evaluar la letalidad y la función in vivo.
• Ensayos de unión in vitro para determinar objetivos de ADN.
• Ensayos in vivo para evaluar la sustitución funcional de los sitios reguladores.

Principales resultados:

• RAP1 fue purificado y su gen aislado.
• La interrupción del gen RAP1 es letal en la levadura.
• RAP1 se une a los sitios de activación aguas arriba (UAS) de los genes de proteínas alfa y ribosómicas MAT.
• Los sitios RAP1 vinculados al UAS pueden reemplazar funcionalmente los sitios de unión del silenciador in vivo.

Conclusiones:

• RAP1 es un gen esencial en la levadura.
• RAP1 es un versátil regulador de la transcripción.
• La función de RAP1 (activación o represión) es dependiente del contexto de su sitio de unión.