¿Los Aptamers son siempre vinculantes? La necesidad de un enfoque analítico multifacético para demostrar la afinidad...

Área de la Ciencia:

• Bioquímica y Biología Molecular
• Química analítica
• Biotecnología

Sus antecedentes:

• Los aptámeros se utilizan cada vez más como elementos de bioreconocimiento en diversas estrategias de detección.
• La falta de protocolos estandarizados de control de calidad lleva a datos de rendimiento de aptamer inconsistentes y poco fiables en la literatura.
• Los métodos existentes para caracterizar la unión del aptamer pueden no ser lo suficientemente robustos para las moléculas orgánicas pequeñas.

Objetivo del estudio:

• Evaluar críticamente las capacidades de unión de los aptameros seleccionados contra sus moléculas pequeñas objetivo utilizando múltiples técnicas analíticas.
• Investigar la fiabilidad de un ensayo colorimétrico común que involucra nanopartículas de oro (AuNPs) para la caracterización de aptamer.
• Establecer un marco analítico completo para validar el rendimiento del aptamer.

Principales métodos:

• Análisis comparativo de la unión del aptamero mediante calorimetría de titulación isotérmica (ITC), espectrometría de masas de ionización por nanoelectrospray nativa (ESI-MS nativa) y espectroscopia de resonancia magnética nuclear de protones (1H NMR).
• Evaluación de la unión del aptamer de ampicilina en solución y en presencia de nanopartículas de oro (AuNPs).
• Validación del método analítico utilizando aptameros bien caracterizados para la cocaína/quinina (MN4) y la l-argininamida (1OLD).

Principales resultados:

• Ninguno de los aptameros de ampicilina analizados demostró una unión específica a la ampicilina, al contrario de lo que se había informado anteriormente.
• El ensayo colorimétrico con AuNPs arrojó resultados contradictorios y no confirmó la unión específica a la ampicilina.
• Los estudios de CTI y RMN 1H, incluidos los con AuNPs, no proporcionaron evidencia de interacciones específicas entre ampicilina y aptamer.

Conclusiones:

• El estudio pone de manifiesto discrepancias significativas en las afinidades de unión de aptamer notificadas, especialmente para las moléculas orgánicas pequeñas.
• Un método analítico único es insuficiente; es esencial un enfoque multifacético que combine datos termodinámicos y estructurales para una validación precisa del aptámero.
• Los hallazgos subrayan la necesidad de un riguroso control de calidad y validación de los aptámeres antes de su aplicación en sistemas de diagnóstico y detección.