Cribado de alto rendimiento con espectrometría de masas SAMDI para la evolución dirigida

Área de la Ciencia:

• Biocatálisis
• Ingeniería de enzimas
• Química analítica

Sus antecedentes:

• La evolución dirigida avanza en el descubrimiento de enzimas, pero a menudo utiliza cribado de bajo rendimiento.
• Los métodos basados en cromatografía limitan la escala y la velocidad de la evaluación de la variante enzimática.

Objetivo del estudio:

• Presentar una estrategia de alto rendimiento para el cribado de variantes enzimáticas.
• Para permitir la evaluación directa de miles de variantes de enzimas para mejorar la actividad.

Principales métodos:

• Immovilización de productos de reacción no purificados en una monocapa autoensamblada.
• Análisis espectrométrico de masas de productos inmovilizados.
• Aplicación a las bibliotecas de variantes del citocromo P411 con mutaciones aleatorias.

Principales resultados:

• Demostró una estrategia de alto rendimiento para la detección de variantes de enzimas.
• Se identificaron con éxito catalizadores mejorados para la alquilación de C-H utilizando variantes del citocromo P411.
• Logró la evaluación directa de miles de variantes en menos de una hora.

Conclusiones:

• El método desarrollado aumenta significativamente el rendimiento del cribado enzimático.
• Esta técnica puede adaptarse para desarrollar actividad enzimática para diversas transformaciones químicas.
• Acelera el descubrimiento de nuevos y mejorados biocatalizadores.