Examen de las bibliotecas de moléculas pequeñas codificadas por el ADN dentro de una célula viva

Área de la Ciencia:

• La bioquímica
• Biología molecular
• Descubrimiento de drogas

Sus antecedentes:

• Las bibliotecas de moléculas pequeñas codificadas por ADN (DEL) son herramientas poderosas para identificar nuevos moduladores de proteínas terapéuticas.
• El cribado in vivo de los DEL ha sido limitado por los desafíos en la entrega de bibliotecas a través de las membranas celulares.

Objetivo del estudio:

• Para informar de la primera detección exitosa de un DEL de varios millones de miembros dentro de una célula viva.
• Establecer un nuevo método para el cribado in vivo del DEL utilizando ovocitos de Xenopus laevis.

Principales métodos:

• Se utilizaron grandes ovocitos de Xenopus laevis (1 μL) para la inyección directa de DEL, superando los problemas de entrega de la membrana celular.
• Las proteínas objetivo expresadas se fusionan con una proteína de presa dentro de los ovocitos para el etiquetado y la discriminación específicos del ADN.
• Examinado un DEL de 194 millones de miembros contra p38α, ACSS2 y objetivos de proteínas DOCK5.

Principales resultados:

• Se realizó con éxito el cribado DEL in vivo en células vivas.
• Identificación de múltiples agrupaciones químicas para los tres objetivos analizados (p38α, ACSS2, DOCK5).
• Se obtuvieron resultados validados con potencias nanomolares de un solo dígito para el objetivo p38α.

Conclusiones:

• Demostró un nuevo y poderoso enfoque para el cribado del DEL en un contexto fisiológico.
• Elimina la necesidad de proteínas objetivo altamente purificadas, simplificando el proceso de selección.
• Listo para ampliar el rango de objetivos susceptibles de DEL y reducir las tasas de desgaste de drogas candidatas.