Identificación de las proteínas de unión a la poli (ADP-ribosa) con proteomías basadas en fotoafinidad

Área de la Ciencia:

• La bioquímica
• Biología molecular
• Proteomía

Sus antecedentes:

• La poli (ADP-ribosa) (PAR) es crucial para la respuesta al daño del ADN y es el objetivo de las terapias contra el cáncer.
• Las funciones moleculares y los socios de unión de PAR siguen siendo incompletamente entendidos.
• La identificación de las proteínas de unión PAR es esencial para elucidar las vías de señalización PAR.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar un método para la identificación de las proteínas de unión endógenas a la ADP-ribosa (PAR).
• Crear un censo exhaustivo de las proteínas de unión PAR, incluidos los nuevos candidatos.
• Investigar el papel de la longitud del polímero PAR en la unión y señalización de proteínas.

Principales métodos:

• Síntesis de una nueva sonda de fotoafinidad PAR.
• Captura de afinidad y aislamiento de proteínas endógenas de unión a PAR.
• Confirmación de la unión PAR mediante ensayos de desplazamiento de movilidad electroforética y de descenso.
• Análisis de la selectividad de unión a las proteínas utilizando sondas PAR de longitudes definidas.

Principales resultados:

• Identificación de docenas de proteínas conocidas y cientos de nuevas proteínas de unión PAR.
• Confirmación de la unión PAR para ocho nuevas proteínas candidatas.
• Demostración de la unión PAR dependiente de la longitud, con proteínas que muestran preferencia por cadenas PAR más largas (40-mer frente a 8-mer).
• Asociación de la unión de PAR con el metabolismo del ARN y la formación de condensados biomoleculares.

Conclusiones:

• El estudio proporciona el primer censo completo de las proteínas de unión PAR.
• La longitud del polímero PAR es un regulador crítico de las interacciones y la señalización de la proteína PAR.
• Las proteínas de unión PAR recientemente identificadas ofrecen objetivos terapéuticos potenciales en el cáncer y otras enfermedades.