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Conversión de una proteína anclada en PI a una proteína de membrana integral por una sola mutación de aminoácido
G L Waneck1, M E Stein, R A Flavell
1Biogen Research Corporation, Cambridge, MA 02142.
Science (New York, N.Y.)
|August 5, 1988
Resumen
Un solo cambio de aminoácido en la glicoproteína Qa-2 la convierte de una proteína ligada al fosfatidilinositol (PI) a una proteína de membrana integral, alterando sus propiedades de anclaje en la membrana.
Área de la Ciencia:
- Inmunología Inmunología.
- Biología Molecular Biología Molecular
- Biología celular Biología celular.
Sus antecedentes:
- Qa-2 es una glicoproteína de la superficie celular vinculada a la membrana celular a través del fosfatidilinositol (PI).
- Es estructuralmente similar a los antígenos de trasplante de clase I (H-2 K, D, L), que son glicoproteínas de membrana integrales.
- El segmento transmembranar de Qa-2 difiere de H-2 K, D, L por un aspartato en la posición 295.
Objetivo del estudio:
- Investigar las consecuencias funcionales de alterar el segmento transmembrana de Qa-2.
- Para determinar si una sustitución específica de aminoácidos puede cambiar el mecanismo de anclaje de la membrana de Qa-2.
- Para comparar las propiedades de la Qa-2 mutada con las proteínas de membrana integral como H-2D.
Principales métodos:
- Mutagenesis dirigida al sitio para introducir un cambio de una sola base en el gen Qa-2, reemplazando el aspartato por la valina en la posición 295.
- Análisis de la expresión de Qa-2 en la superficie celular y el anclaje de la membrana.
- Analiza la sensibilidad a la fosfolipasa C específica de PI y la escisión de la papaína.
- Evaluación de la fijación de anclaje de PI a otras proteínas endógenas en células que expresan el mutante Qa-2.
Principales resultados:
- Una sustitución de un solo aminoácido (Asp295Val) hizo que la superficie celular Qa-2 fuera insensible a la hidrólisis de la fosfolipasa C específica de PI.
- La mutación Asp295Val también aumentó la resistencia a la escisión de la papaína, una propiedad compartida con H-2D.
- Las células que expresan el mutante Qa-2 conservan la capacidad de anclar PI a otras proteínas como Thy-1 y J11D.
Conclusiones:
- Un solo cambio de aminoácido en la posición 295 convierte a Qa-2 de una glicoproteína ligada a PI a una proteína de membrana integral.
- Esta mutación imita las características de anclaje de membrana de los antígenos de trasplante H-2D.
- Los hallazgos destacan el papel crítico de los aminoácidos específicos en la determinación de la asociación de la membrana proteica.