Purificación del interferón de ratón por cromatografía de afinidad secuencial en columnas de agaroza de poli (U) - y...

Área de la Ciencia:

• La bioquímica es la bioquímica.
• Inmunología Inmunología.
• Biología Molecular Biología Molecular

Sus antecedentes:

• Las interferonas son proteínas de señalización cruciales en el sistema inmunológico.
• Comprender la estructura y función del interferón es clave para desarrollar terapias antivirales.

Objetivo del estudio:

• Para purificar el interferón de ratón a la homogeneidad.
• Para caracterizar los componentes de interferón purificados y sus actividades antivirales.

Principales métodos:

• Cromatografía de afinidad de dos pasos para la purificación.
• Electroforesis en gel de dodecilo sulfato de sodio-poliacrilamida (SDS-PAGE) para la determinación del peso molecular.
• Coloración periódica ácido-Schiff (PAS) para detectar la glucosilación.

Principales resultados:

• El interferón de ratón fue purificado hasta la homogeneidad.
• Se identificaron dos bandas polipeptídicas con actividad antiviral en pesos moleculares de 35.000 y 22.000.
• La banda de 35.000 MW fue PAS-positiva, lo que indica la glucosilación, mientras que la banda de 22.000 MW no lo fue.
• Se determinó que la actividad específica era de 8 x 10^9 unidades de laboratorio (2.4 x 10^9 unidades de referencia de los NIH).

Conclusiones:

• El interferón de ratón existe en al menos dos formas distintas con propiedades antivirales.
• La glicosilación puede desempeñar un papel en la función o estabilidad de una forma de interferón.