Una estrategia de etiquetado universal para los ácidos nucleicos en microscopía de expansión

Área de la Ciencia:

• Biología molecular
• Técnicas de microscopía
• La genética

Sus antecedentes:

• La microscopía de expansión (ExM) permite imágenes a nanoescala del ARN dentro de las células.
• Los métodos actuales para el etiquetado de ARN en ExM pueden ser complejos.
• Se necesita una mejor resolución espacial de los patrones de expresión génica.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar y validar reactivos multivalentes para el etiquetado simplificado de ARN en ExM.
• Evaluar la compatibilidad de estos reactivos con las técnicas existentes, como el ARN FISH.
• Para obtener imágenes de ARN a nanoescala de alta resolución con ExM.

Principales métodos:

• Desarrollo de reactivos multivalentes para la fijación de sondas de oligonucleótidos de ADN.
• Integración de los reactivos con la reacción en cadena de hibridación in situ del ARN FISH.
• Aplicación de reactivos para la coloración multicolor y la obtención de imágenes.
• Validación de las estrategias de etiquetado en ×4 y ×10 ExM.

Principales resultados:

• Los reactivos son compatibles con el ARN FISH y aseguran la retención de la transcripción.
• Se logró una tinción multicolor exitosa utilizando el método desarrollado.
• Se obtiene una resolución de ~50 nm en ×10 ExM con etiquetado pre y postexpansión.
• Se ha demostrado una rápida funcionalización de los oligonucleótidos de ADN para ExM.

Conclusiones:

• Las nuevas moléculas multivalentes agilizan la funcionalidad de los oligonucleótidos de ADN para ExM.
• Este enfoque mejora las capacidades de imágenes de ARN a nanoescala.
• El método admite la tinción multicolor y la transcriptómica espacial de alta resolución.