Los biosensores basados en la exposición al péptido muestran conformaciones de una sola molécula en células vivas

Área de la Ciencia:

• La biofísica
• Biología celular
• Biología molecular

Sus antecedentes:

• El estudio de la conformación de proteínas individuales en células vivas es un desafío.
• Los métodos existentes a menudo carecen de especificidad o capacidades de seguimiento en tiempo real.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar un nuevo biosensor para el monitoreo en tiempo real de la conformación y dinámica de las proteínas in vivo.
• Para permitir el seguimiento de partículas individuales (SPT) y los estudios de transferencia de energía de resonancia de Förster (FRET) del comportamiento de las proteínas.

Principales métodos:

• Diseñado un sistema de "ligante / etiqueta" donde la exposición al disolvente de una etiqueta peptídica, controlada por la conformación de la proteína, dicta la unión a una proteína reportera.
• Se utilizó la excitación directa de tintes brillantes para la localización de la fluorescencia y el seguimiento de proteínas individuales.
• Se ha aplicado el SPT y el análisis cuantitativo para controlar los grupos de proteínas y la dinámica de activación.

Principales resultados:

• Demostró la capacidad de seguir la trayectoria y la conformación de proteínas individuales en células vivas.
• Observación de islas de difusión lenta de Src activado dentro de grupos de Src y dinámica de activación en adherencias.
• El análisis cuantitativo y el modelado revelaron la cinética del Src in vivo.

Conclusiones:

• El enfoque de aglutinante/etiqueta proporciona un método simple pero específico para crear biosensores para SPT y FRET.
• Esta técnica ofrece acceso al estudio de la conformación y la dinámica de diversas proteínas in vivo.
• El método facilita el análisis cuantitativo de la cinética de las proteínas dentro de los entornos celulares.