Identificación por fusión celular de secuencias de genes que interactúan con factores positivos de acción trans

Área de la Ciencia:

• * Biología Molecular.
• * Regulación genética.
• * Biología celular * Biología celular

Sus antecedentes:

• * Los estudios de fusión celular sugieren que los factores reguladores controlan la expresión génica específica de la célula.
• * Caracterizar las secuencias de ADN de acción cis que interactúan con estos factores es un desafío.
• * Los métodos anteriores limitaban la identificación de nuevas secuencias de ADN reguladoras.

Objetivo del estudio:

• * Desarrollar y aplicar una técnica de transfección-fusión para estudiar la regulación génica específica del tipo de célula.
• * Para identificar secuencias de ADN de acción cis y sitios de unión al ADN involucrados en la regulación génica.
• * Para caracterizar el mecanismo de la activación génica mediada por la fusión celular.

Principales métodos:

• * Transferencia génica estable combinada con formación de heterocariones transitorios (transfección-fusión).
• * Se utilizó una región promotora de prolactina de rata quiescente transferida de manera estable a los fibroblastos de ratón.
• * Se emplearon ensayos nucleares de ejecución y análisis de mutaciones de 5'-deleción.

Principales resultados:

• * La fusión con células pituitarias de rata activó la transcripción del promotor de prolactina de rata transferido.
• * Se identificó una secuencia de ADN de 30 pares de bases como esencial para esta activación.
• * La técnica no activó un promotor de la hormona de crecimiento de la rata transferido o genes endógenos.

Conclusiones:

• * La técnica de transfección-fusión identificó con éxito una nueva secuencia de ADN reguladora.
• * Este método es eficaz para descubrir elementos de acción cis involucrados en la expresión génica específica del tipo de célula.
• * Las células pituitarias poseen factores específicos que activan el promotor del gen de la prolactina.