Nuevos elementos extracromosómicos submicroscópicos que contienen genes amplificados en células humanas

Área de la Ciencia:

• Genética La genética.
• Biología Molecular Biología Molecular
• Biología celular Biología celular.

Sus antecedentes:

• Las líneas celulares resistentes al metotrexato (MTX) a menudo exhiben amplificación génica de la dihidrofolato reductasa (DHFR).
• Las variantes anteriores de HeLa BU25 resistentes a MTX mostraron una alta amplificación del gen DHFR sin las típicas regiones de tinción homogénea (HSR) o numerosos cromosomas diminutos.

Objetivo del estudio:

• Caracterizar la naturaleza física de los genes amplificados de DHFR en las células HeLa BU25-10B3 resistentes al MTX.
• Investigar el potencial de nuevas anomalías cariotípicas asociadas con la amplificación génica.

Principales métodos:

• Aislamiento de estructuras de ADN que contienen genes DHFR amplificados mediante electroforesis en gel de gradiente de campo pulsado o de inversión de campo.
• Caracterización de estas estructuras como moléculas de ADN homogéneas de aproximadamente 650 kb.
• La microscopía electrónica de la metafase se extiende para visualizar las estructuras relacionadas de la cromatina.

Principales resultados:

• Aislaron con éxito ~650 kb de moléculas de ADN homogéneas que contienen genes amplificados de DHFR de las células HeLa BU25-10B3.
• Las fibras de cromatina observadas en microscopía electrónica son consistentes con estas estructuras de ADN extracromosómico.
• Demostró un nuevo tipo de estructura extracromosómica que facilita la amplificación de genes.

Conclusiones:

• Los genes DHFR amplificados en las células HeLa BU25-10B3 existen en nuevas moléculas de ADN extracromosómico.
• Estos hallazgos amplían la comprensión de los mecanismos subyacentes a la amplificación génica en las células de mamíferos.
• Sugiere una nueva clase de elementos extracromosómicos involucrados en la resistencia a los medicamentos.