Biosensor fluorescente para medir la actividad de Ras en las células vivas

Área de la Ciencia:

• Biología molecular
• Biología celular
• La bioquímica

Sus antecedentes:

• Las Ras GTPasas son reguladores clave del crecimiento celular, y su desregulación es común en el cáncer.
• Dirigirse a Ras es un objetivo importante en la terapia del cáncer, pero requiere comprender su actividad en las células vivas.
• Los métodos actuales para medir la actividad de Ras en las células son limitados.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar un nuevo reportero para la medición cuantitativa y en tiempo real de la actividad de Ras en células vivas.
• Investigar la regulación espacio-temporal de las isoformas Ras e identificar los reguladores aguas arriba.
• Evaluar la dinámica de la inhibición de Ras por los inhibidores covalentes de KRasG12C.

Principales métodos:

• Desarrollo de un relator de actividad Ras ratiométrico (RasAR) para imágenes de células vivas.
• Utilizando RasAR dirigido subcelularmente para estudiar la regulación de la isoforma Ras.
• Monitoreo de la actividad Ras en tiempo real después del tratamiento con inhibidores de KRasG12C.

Principales resultados:

• RasAR permite la medición cuantitativa y de alta resolución de la actividad Ras en todas las isoformas primarias.
• La Src quinasa fue identificada como un inhibidor ascendente de HRas.
• RasAR reveló una actividad Ras persistente durante horas incluso con inhibidores de KRasG12C como Sotorasib.

Conclusiones:

• RasAR es una herramienta versátil para interrogar la actividad de Ras en células vivas.
• El reportero facilita la comprensión de la biología Ras y el desarrollo de terapias contra el cáncer dirigidas a Ras.
• Los resultados ponen de relieve la necesidad de estrategias para superar la actividad residual de Ras durante el tratamiento con inhibidores.