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Labeling DNA Probes03:31

Labeling DNA Probes

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DNA probes are fragments of DNA labeled with a reporter tag to enable their detection or purification. The resulting labeled DNA probes can then hybridize to target nucleic acid sequences through complementary base-pairing, and may be used to recover or identify these regions.
Radioisotopes, fluorophores, or small molecule binding partners like biotin or digoxigenin, are the most widely used reporter tags for labeling DNA probes. These labels can be attached to the probe DNA molecule via...
8.2K
Chromatin Immunoprecipitation- ChIP02:36

Chromatin Immunoprecipitation- ChIP

11.2K
Chromatin immunoprecipitation, or ChIP, is an antibody-based technique used to identify sites on DNA that bind to transcription factors of interest or histone proteins. It also helps determine the type of histone modifications such as acetylation, phosphorylation, or methylation.
Types of ChIP
ChIP can be divided into two types - X-ChIP and N-ChIP. X-ChIP involves in vivo cross-linking of histones and regulatory proteins to DNA, fragmenting the DNA by sonication, and isolating the protein-DNA...
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Seguimiento de los cambios de estado de la cromatina mediante el etiquetado de fotoproximidad a nanoescala

Ciaran P Seath1,2,3, Antony J Burton2,4, Xuemeng Sun2

  • 1Merck Center for Catalysis at Princeton University, Princeton, NJ, USA.

Nature
|April 5, 2023
PubMed
Resumen

Desarrollamos μMap, un método de etiquetado de proximidad a nanoescala, para mapear las interacciones entre proteínas nucleares. Esta técnica revela cómo estas interacciones cambian con las mutaciones del cáncer y los tratamientos farmacológicos, avanzando el descubrimiento de fármacos epigenéticos.

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Área de la Ciencia:

  • La bioquímica
  • Biología molecular
  • Biología Química

Sus antecedentes:

  • Los procesos celulares dependen de las interacciones biomoleculares, cruciales para el destino celular.
  • Las interacciones alteradas pueden conducir a enfermedades o efectos terapéuticos.
  • El mapeo de las interacciones entre proteínas nucleares es un desafío debido a la baja abundancia, la unión transitoria y las limitaciones tecnológicas.

Objetivo del estudio:

  • Desarrollar un nuevo método para mapear las interacciones entre proteínas nucleares.
  • Investigar los cambios en los interactomas nucleares en respuesta a las mutaciones del cáncer y los tratamientos farmacológicos.

Principales métodos:

  • Incorporación sin rastro de fotosensibilizadores de iridio en el núcleo utilizando inteínas divididas por ingeniería.
  • Activación de las ojivas de diazirina a través de la transferencia de energía de Dexter para formar carbenos reactivos.
  • Etiquetado de proximidad a nanoescala (μMap) para el enlace cruzado y el análisis quimioproteómico cuantitativo.

Principales resultados:

  • μMap mapea con éxito las interacciones entre proteínas nucleares dentro de un radio de ~ 10 nm.
  • El método reveló cambios críticos en los interactomas asociados con mutaciones cancerosas.
  • μMap identificó interacciones alteradas tras el tratamiento con inhibidores de moléculas pequeñas.

Conclusiones:

  • μMap proporciona una herramienta poderosa para comprender las interacciones entre proteínas nucleares.
  • Esta técnica mejora la comprensión fundamental de los microambientes nucleares.
  • Se espera que μMap tenga un impacto significativo en el descubrimiento de fármacos epigenéticos en el mundo académico y la industria.