Grabación de información vinculante directamente en las bibliotecas codificadas por ADN utilizando la transferasa de...

Área de la Ciencia:

• La bioquímica
• Biología molecular
• Descubrimiento de drogas

Sus antecedentes:

• La transferasa desoxinucleotidil terminal (TdT) es una polimerasa de ADN única.
• Las bibliotecas codificadas por ADN (DEL) son herramientas poderosas para el descubrimiento de fármacos.
• Los métodos tradicionales de selección de afinidad tienen limitaciones en la identificación de enlaces de afinidad moderada.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar un nuevo método para la identificación de los aglutinantes de los DEL utilizando TdT.
• Mejorar la sensibilidad y el rango de selección de afinidad en el cribado DEL.
• Para crear un registro molecular estable de los eventos de unión dentro de los DEL.

Principales métodos:

• Las proteínas objetivo se fusionaron con TdT.
• Incubación de proteínas fusionadas con TdT con DEL en presencia de dATP.
• Síntesis de cola de poliadenina (polyA) en los enlaces de ADN, con la longitud de la cola correlacionada con la afinidad de unión.
• Enriquecimiento de aglutinantes mediante cuentas magnéticas de polietileno.
• Secuenciación para identificar aglutinantes enriquecidos.

Principales resultados:

• La extensión de TdT generó con éxito colas de poliA en los enlaces de ADN.
• La longitud de la cola de PolyA sirvió como una medida directa de la afinidad de unión.
• Se identificaron ligandos con afinidades de unión nanomolar a micromolar de dos dígitos.
• Este método superó a la selección de afinidad clásica para la identificación de un rango de afinidad más amplio.

Conclusiones:

• La síntesis de cola de poliA mediada por TdT es un método simple y eficaz para la selección del aglutinante DEL.
• La técnica amplía significativamente el rango de afinidad de unión detectable en comparación con los métodos tradicionales.
• Este enfoque ofrece una herramienta robusta y versátil para acelerar el descubrimiento de fármacos utilizando DEL.