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Updated: Jul 16, 2025

Gene Knock-in by CRISPR/Cas9 and Cell Sorting in Macrophage and T Cell Lines

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Published on: November 13, 2021

Descubrimiento agrupado modular de secuencias knockin sintéticas para programar terapias celulares duraderas

Franziska Blaeschke¹, Yan Yi Chen¹, Ryan Apathy¹

¹Gladstone-UCSF Institute of Genomic Immunology, San Francisco, CA 94158, USA; Department of Medicine, University of California, San Francisco, San Francisco, CA 94143, USA.

|September 15, 2023

Resumen

Una nueva plataforma de detección, ModPoKI, permite la comparación rápida de modificaciones genéticas para mejorar las terapias con células T. Identificó un constructo de factor de transcripción (TFAP4) que mejora la función de las células CAR-T contra el cáncer.

Área de la Ciencia:

Inmunología
Biología molecular
La bioingeniería

Sus antecedentes:

La estimulación crónica deteriora la función de las células T, limitando la eficacia de la inmunoterapia celular.
El desarrollo de métodos para detectar numerosas modificaciones genéticas es crucial para la reprogramación de las funciones de las células T.
Los métodos existentes carecen de la escalabilidad para comparar grandes bibliotecas de secuencias sintéticas.

Objetivo del estudio:

Desarrollar una plataforma adaptable para el cribado de alto rendimiento de las bibliotecas de knockin de ADN (KI).
Identificar construcciones genéticas que mejoran la aptitud de las células T y la función anticancerosa bajo estimulación crónica.
Para permitir el descubrimiento de combinaciones complejas de genes para la programación celular.

Principales métodos:

Desarrolló el cribado modular de inteligencia artificial (ModPoKI), una plataforma para la construcción modular de bibliotecas de inteligencia artificial de ADN utilizando adaptadores con código de barras.
Se crearon bibliotecas ModPoKI que contienen 100 factores de transcripción (TF) y 129 receptores de superficie (SR).
Se realizaron más de 30 exámenes ModPoKI en células T receptoras (TCR) y células T receptoras de antígenos quiméricos (CAR) humanos.

Principales resultados:

Se identificó un constructo del factor de transcripción AP4 (TFAP4) que mejoró significativamente la aptitud de las células CAR-T y la actividad anticancerígena in vitro e in vivo.
Demostró la modularidad de ModPoKI al generar una biblioteca de aproximadamente 10,000 combinaciones de TF.
Se ha demostrado una mejor aptitud de las células T mediante el KI no viral de un constructo policistrónico BATF-TFAP4, con una co-sobreexpresión de BATF y TFAP4 que regulan objetivos genéticos clave.

Conclusiones:

ModPoKI es una plataforma efectiva para descubrir construcciones genéticas complejas para programar funciones celulares.
La coexpresión de TFAP4 y BATF puede reprogramar la función de las células T, mejorando la aptitud durante la estimulación crónica.
Esta plataforma acelera el desarrollo de inmunoterapias celulares mejoradas.

Palabras clave:

CRISPR y sus derivados Receptor del antígeno quimérico estimulación crónica células T humanas inmunoterapia - No lo sé.pantallas agrupadas receptor de superficie sintético Factor de transcripción

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