Análisis de enlace transcripcional con AAV-Perturb-seq in vivo

Área de la Ciencia:

• La genética
• La neurociencia
• Biología molecular

Sus antecedentes:

• El estudio de las relaciones genotipo-fenotipo en tejidos complejos requiere métodos de alto rendimiento.
• Las variantes genéticas vinculadas a las patologías humanas requieren herramientas de investigación avanzadas.

Objetivo del estudio:

• Introducir el cribado CRISPR directo in vivo de una sola célula mediado por el virus adeno-asociado (AAV) (AAV-Perturb-seq).
• Aplicar AAV-Perturb-seq para diseccionar el paisaje fenotípico de los genes del síndrome de deleción 22q11.2 en el cerebro de ratón adulto.
• Identificar genes y vías involucradas en la función neuronal y los mecanismos de la enfermedad.

Principales métodos:

• Desarrollado y aplicado AAV-Perturb-seq para el cribado in vivo de CRISPR.
• Utilizó la edición de genes y la inhibición de la transcripción en la corteza prefrontal de ratones adultos.
• Se realizó un análisis de enlace transcripcional y un fenotipo de alta resolución.

Principales resultados:

• Identificaron tres genes vinculados a 22q11.2 que influyen en las funciones neuronales, explicando ~ 40% de los cambios de transcripción en un modelo de eliminación de 22q11.2.
• Descubrieron vías no descritas previamente involucradas en la función neuronal.
• Se encontró que el fenotipo del síndrome de deleción 22q11.2 en las neuronas puede provenir de un procesamiento de ARN desregulado y genes de función sináptica.

Conclusiones:

• AAV-Perturb-seq es un método flexible y escalable para estudios de perturbación genética in vivo.
• El estudio proporciona una comprensión causal de los mecanismos biológicos y de la enfermedad relacionados con el síndrome de deleción 22q11.2.
• Los hallazgos sugieren posibles objetivos terapéuticos para el síndrome de deleción 22q11.2 y trastornos relacionados.