Mapas de mutagenesis de edición de bases para ajustar las funciones de las células T humanas

Área de la Ciencia:

• Inmunología
• Biología molecular
• Ingeniería genética

Sus antecedentes:

• El cribado CRISPR identifica genes que controlan la función de las células T para objetivos de inmunoterapia.
• Se necesitan nuevos métodos para investigar secuencias específicas de nucleótidos dentro de genes críticos.
• La mutagénesis sistemática en células T humanas puede revelar alelos que modulan fenotipos específicos.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar una plataforma de mutagenesis de edición de bases a gran escala para identificar nucleótidos que sintonizan la activación de las células T.
• Identificar los residuos de aminoácidos específicos que regulan la activación de las células T y la producción de citoquinas.

Principales métodos:

• Generó una biblioteca de ~ 117,000 moléculas de ARN guía única para editores de bases dirigidas a sitios codificadores de proteínas en 385 genes relacionados con las células T.
• Realizó mutagenesis de edición de bases sistemática en células T humanas primarias.
• Utilizó un editor de base con requisitos relajados de motivos adyacentes al protospacer para la detección de mayor resolución.

Principales resultados:

• Se identificaron numerosos alelos con variantes en los residuos críticos de proteínas (por ejemplo, PIK3CD, VAV1, LCP2, PLCG1, DGKZ), incluidas las mutaciones de ganancia y pérdida de función.
• Se ha demostrado que los golpes de edición de bases pueden modular positivamente y negativamente la función citotóxica de las células T.
• Se revelaron dominios estructurales específicos y sitios de interacción proteína-proteína que regulan la función de las células T a través de un cribado de mayor resolución.

Conclusiones:

• Las pantallas de edición de bases en las células inmunes primarias ofrecen información bioquímica sobre la regulación de las células T.
• Esta plataforma tiene el potencial de acelerar el diseño y desarrollo de nuevas inmunoterapias.
• Se han identificado nucleótidos y residuos específicos que pueden dirigirse a las funciones de las células T con fines terapéuticos.